[发明专利]一种青蛤血管紧张素转换酶抑制肽制备方法

摘要

本发明公开了一种青蛤血管紧张素转换酶抑制肽制备方法，包括以下步骤：（1）青蛤预处理；（2）酶解；（3）超滤分离；（4）快速蛋白纯化系统分离纯化；（5）高效液相色谱系统分离纯化。本发明以青蛤为原料，通过胰蛋白酶酶解青蛤，并利用超滤技术、快速蛋白纯化系统和高效液相色谱系统对酶解液进行分离纯化后得到一种新的血管紧张素转换酶抑制肽（ACE抑制肽），提取分离工艺合理，可操作性强，为从青蛤中制备高活性的ACE抑制肽提供了实验依据。

主权项

一种青蛤血管紧张素转换酶抑制肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）青蛤预处理：将青蛤除壳、剥肉后，用清水把蛤肉洗净，经高速组织搅碎机匀浆后用0.1mol/L的NaOH浸泡3~5h，过滤后滤渣用纯化水泡洗至pH呈中性，脱水后得青蛤肉渣，备用；（2）酶解：将步骤（1）中的青蛤肉渣加入胰蛋白酶进行酶解，酶解条件为：料液比1：2~3，加酶量1000~1200U/g，pH 值7.5~8.5，酶解温度45~50℃，酶解时间9~12 h，酶解完成后用沸水浴灭活，预冷后离心，得上清液；（3）超滤分离：将上清液经0.45μm滤膜抽滤后，用截留分子量为3ku的超滤膜进行超滤，得超滤液；（4）快速蛋白纯化系统分离纯化：将步骤（3）中的超滤液经快速蛋白纯化系统进行分离纯化，得到五个活性组分，分别取样测定该五个活性组分的血管紧张素转换酶抑制活性，取血管紧张素转换酶抑制活性最高的组分记为组分A；（5）高效液相色谱系统分离纯化：将组分A经高效液相色谱系统（HPLC）分离纯化，得到七个活性组分，分别取样测定该七个活性组分的血管紧张素转换酶抑制活性，取血管紧张素转换酶抑制活性最高的组分记为组分B，组分B经纯度检测后，即得氨基酸序列为：Trp‑Pro‑Met‑Gly‑ Phe（TPMGP）的血管紧张素转换酶抑制肽。