[发明专利]基于sanger测序人线粒体基因组的方法

摘要

本发明公开了一种基于sanger测序人线粒体基因组的方法，所述方法包括如下步骤：人总DNA提取；根据NCBI数据库中已测出的人线粒体序设计覆盖线粒体全长的引物对，对人总DNA进行PCR扩增；回收PCR扩增产物，获得人线粒体特定的基因片段；对所述基因片段进行测序；用CExpress对测得的序列根据引物对与引物对之间的序列重叠区进行拼接，组装得到人线粒体全序列。本发明只需提取人总DNA，避免了提取较高纯度mtDNA繁琐的实验操作过程，然后根据NCBI数据库中已测出的人线粒体序列设计覆盖线粒体全长的引物对，对总DNA进行扩增，得到线粒体特定的基因片段，进行测序，减少了对于总DNA测序的数据量。

主权项

1.一种基于sanger测序人线粒体基因组的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、人总DNA提取；S2、根据NCBI数据库中已测出的人线粒体序列 设计覆盖线粒体全长的引物对，对人总DNA进行PCR扩增；S3、回收PCR扩增产物，获得人线粒体特定的基因片段；S4、对所述基因片段进行测序；用CExpress对测得的序列根据引物对与引物对之间的序列重叠区进行拼接，组装得到人线粒体全序列；步骤S2中，所述引物对包括如SEQ ID NO.1所示的HS‑12S‑F和如SEQ ID NO.2所示的HS‑12S‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.3所示的HS‑16S‑F和如SEQ ID NO.4所示的HS‑16S‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.5所示的HS‑C1‑F和如SEQ ID NO.6所示的HS‑C1‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.7所示的HS‑C2‑F和如SEQ ID NO.8所示的HS‑C2‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.9所示的HS‑N2‑F和如SEQ ID NO.10所示的HS‑N2‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.11所示的HS‑CB‑F和如SEQ ID NO.12所示的HS‑CB‑R构成的引物对,如SEQ ID NO.13所示的HS‑C3‑F和如SEQ ID NO.14所示的HS‑C3‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.15所示的HS‑N4‑F和如SEQ ID NO.16所示的HS‑N4‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.17所示的HS‑N5‑F和如SEQ ID NO.28所示的HS‑N5‑R构成的引物对，如SEQ ID NO.19所示的HS‑12S‑S和如SEQ ID NO.20所示的HS‑16S‑C构成的引物对,如SEQ ID NO.21所示的HS‑N2‑S和如SEQ ID NO.22所示的HS‑C1‑C构成的引物对,如SEQ ID NO.23所示的HS‑N1‑F和如SEQ ID NO.24所示的HS‑N1‑R构成的引物对,如SEQ ID NO.25所示的HS‑CB‑S和如SEQ ID NO.26所示的HS‑12S‑C构成的引物对,如SEQ ID NO.27所示的HS‑C2‑S和如SEQ ID NO.28所示的HS‑C3‑C构成的引物对，如SEQ ID NO.29所示的HS‑C3‑S和如SEQ ID NO.30所示的HS‑N4‑C构成的引物对，如SEQ ID NO.31所示的HS‑N4‑S和如SEQ ID NO.32所示的HS‑N5‑C构成的引物对，如SEQ ID NO.33所示的HS‑N5‑S和如SEQ ID NO.34所示的HS‑CB‑C构成的引物对，如SEQ ID NO.35所示的HS‑C1‑S和如SEQ ID NO.36所示的HS‑C2‑C构成的引物对，如SEQ ID NO.37所示的HS‑16S‑S和如SEQ ID NO.38所示的HS‑N1‑C构成的引物对。