[发明专利]基于sanger测序人线粒体基因组的方法

权利要求书

1.一种基于sanger测序人线粒体基因组的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、人总DNA提取；

S2、根据NCBI数据库中已测出的人线粒体序列 设计覆盖线粒体全长的引物对，对人总DNA进行PCR扩增；

S3、回收PCR扩增产物，获得人线粒体特定的基因片段；

S4、对所述基因片段进行测序；用CExpress对测得的序列根据引物对与引物对之间的序列重叠区进行拼接，组装得到人线粒体全序列；

步骤S2中，所述引物对包括如SEQ ID NO.1所示的HS-12S-F和如SEQ ID NO.2所示的HS-12S-R构成的引物对，如SEQ ID NO.3所示的HS-16S-F和如SEQ ID NO.4所示的HS-16S-R构成的引物对，如SEQ ID NO.5所示的HS-C1-F和如SEQ ID NO.6所示的HS-C1-R构成的引物对，如SEQ ID NO.7所示的HS-C2-F和如SEQ ID NO.8所示的HS-C2-R构成的引物对，如SEQID NO.9所示的HS-N2-F和如SEQ ID NO.10所示的HS-N2-R构成的引物对，如SEQ ID NO.11所示的HS-CB-F和如SEQ ID NO.12所示的HS-CB-R构成的引物对,如SEQ ID NO.13所示的HS-C3-F和如SEQ ID NO.14所示的HS-C3-R构成的引物对，如SEQ ID NO.15所示的HS-N4-F和如SEQ ID NO.16所示的HS-N4-R构成的引物对，如SEQ ID NO.17所示的HS-N5-F和如SEQID NO.28所示的HS-N5-R构成的引物对，如SEQ ID NO.19所示的HS-12S-S和如SEQ IDNO.20所示的HS-16S-C构成的引物对,如SEQ ID NO.21所示的HS-N2-S和如SEQ ID NO.22所示的HS-C1-C构成的引物对,如SEQ ID NO.23所示的HS-N1-F和如SEQ ID NO.24所示的HS-N1-R构成的引物对,如SEQ ID NO.25所示的HS-CB-S和如SEQ ID NO.26所示的HS-12S-C构成的引物对,如SEQ ID NO.27所示的HS-C2-S和如SEQ ID NO.28所示的HS-C3-C构成的引物对，如SEQ ID NO.29所示的HS-C3-S和如SEQ ID NO.30所示的HS-N4-C构成的引物对，如SEQID NO.31所示的HS-N4-S和如SEQ ID NO.32所示的HS-N5-C构成的引物对，如SEQ ID NO.33所示的HS-N5-S和如SEQ ID NO.34所示的HS-CB-C构成的引物对，如SEQ ID NO.35所示的HS-C1-S和如SEQ ID NO.36所示的HS-C2-C构成的引物对，如SEQ ID NO.37所示的HS-16S-S和如SEQ ID NO.38所示的HS-N1-C构成的引物对。

2.根据权利要求1所述的基于sanger测序人线粒体基因组的方法，其特征在于，步骤S2中，所述PCR扩增中，每50.0ul扩增反应体系包括：基因组DNA 1.0ul，含2.5mM Mg2+的10×LA Buffer 5.0ul，5u/μL的LA Taq聚合酶1.0ul，10mM的dNTP 1.0ul，10uM的正向引物1.5ul，10uM的反向引物1.5ul，ddH2O 39.0ul。

3.根据权利要求1所述的基于sanger测序人线粒体基因组的方法，其特征在于，步骤S2中，所述PCR扩增中，PCR反应参数为：预变性95℃，5min；变性95℃，30s；退火55℃，45s；延伸72℃，1min30s；终延伸72℃，7min；循环数45。

4.根据权利要求1所述的基于sanger测序人线粒体基因组的方法，其特征在于，步骤S3中，所述回收是用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行回收。

5.根据权利要求1所述的基于sanger测序人线粒体基因组的方法，其特征在于，步骤S4中，所述测序是基于Sanger双脱氧链终止法进行一代测序。