[发明专利]一种富含叶酸的发酵大豆的制备方法

摘要

本发明公开了一种富含叶酸的发酵大豆的制备方法，该方法采用枯草芽孢杆菌与植物乳杆菌两步法发酵大豆，先使用枯草芽孢杆菌对大豆进行发酵，其产生的蛋白酶将脱脂乳中的乳蛋白降解为氨基酸或多肽，这为植物乳杆菌生长繁殖提供有利条件，从而提高叶酸产量；本发明方法制得的发酵大豆口感较好，易于接受，其中活性成分高，尤其是富含叶酸，适合孕妇服用。

主权项

一种富含叶酸的发酵大豆的制备方法，其特征在于采用枯草芽孢杆菌与植物乳杆菌两步法发酵大豆，提高叶酸含量，具体步骤为：步骤一，将大豆置于水中浸泡12~16 h，滤干水后置于高压灭菌锅内115~121℃灭菌30~40 min；步骤二，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的活化，将冷冻保存于‑80℃的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌取出并迅速解冻，按每5 ml培养基中分别接种50~75 μL和20~30 μL菌液的比例，将浓度均为1×10⁹ cfu/mL的菌液分别接种至灭菌NB和MRS培养基中培养；步骤三，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的扩大培养，将步骤二获得的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌菌液均按体积百分比2%的比例接种于灭菌NB和MRS培养基中扩大培养；步骤四，将步骤三培养后的两种细菌取出置于5000~7000 rpm、4℃下离心10~20 min后，弃去上清液，得到的菌体用质量百分比浓度0.7~0.9%的生理盐水洗脱2~3次，随后加生理盐水重悬菌体，分别获得浓度为10⁶~10⁸ cfu/mL和10⁸~10⁹ cfu/mL的生理盐水菌悬液待用；步骤五，大豆的发酵，将步骤一中灭菌后的大豆冷却至30~40℃，取步骤四得到的10⁶~10⁸ cfu/mL枯草芽孢杆菌菌悬液8~10 mL接种于1kg的大豆中，37~40℃静置培养24~36 h，制成豆豉半成品，待其冷却到25~30℃，取步骤四得到的10⁸~10⁹ cfu/mL植物乳杆菌菌悬液8~10 mL接种于枯草芽孢杆菌发酵的豆豉半成品中，30~37℃静置培养60~72 h，即为发酵大豆。