[发明专利]一种利用实时荧光定量PCR技术检测花生及制品中黄曲霉毒素潜在污染风险的方法

摘要

本发明公开了一种利用实时荧光定量PCR技术检测花生及制品中黄曲霉毒素潜在污染风险的方法，该方法利用四分法采集样品，利用氯化苄法提取DNA，以黄曲霉菌产毒关键基因AFLR为目标基因，设计特异性引物进行荧光定量PCR，根据荧光定量Ct值判断样品受黄曲霉毒素污染的风险，并建立的黄曲霉毒素污染风险与样品荧光定量Ct值的关系模型，本发明为了快速、准确地判断花生及其制品中黄曲霉毒素潜在污染风险，本发明特异性强，稳定性好，灵敏度高，操作简单快速，适合大批量检测。

主权项

一种利用实时荧光定量PCR技术检测花生及制品中黄曲霉毒素潜在污染风险的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)基因组DNA的提取：采用四分法采集花生样品0.1g，采用氯化苄法提取DNA，得到粗DNA后，用DNA纯化试剂盒纯化后，用核酸蛋白定量仪检测浓度，稀释至30ng/uL，存于‑20℃备用。(2)以基因组DNA为模板，以黄曲霉菌产毒关键基因AFLR为目标基因，特异性引物为上游引物5’‑AACCTGATGACGACTGATAT‑3’，下游5’‑AGCACCTTGAGAACGATAA‑3’，进行荧光定量PCR反应。(3)根据荧光定量PCR结果判断花生及制品中是否感染黄曲霉毒素产生菌，当有扩增曲线时，判断花生及制品感染黄曲霉毒素产生菌；未有扩增曲线，判断花生及制品未感染黄曲霉毒素产生菌。(4)根据样品荧光定量PCR的Ct值来判断花生及制品中黄曲霉毒素污染的潜在的风险，花生样品中的黄曲霉毒素潜在风险(黄曲霉毒素含量)和Real‑time PCR的Ct值呈显著的负相关，数学关系方程式为：y＝‑0.0852x+27.257(x为黄曲霉毒素含量)。