[发明专利]一种高产异戊醇的基因工程菌及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种高产异戊醇的基因工程菌及其构建方法和应用。其是在谷氨酸棒杆菌中表达α‑酮异戊酸脱羧酶基因kivd和醇脱氢酶基因adh3，而获得高产异戊醇的基因工程菌，所述的α‑酮异戊酸脱羧酶基因kivd的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的醇脱氢酶基因adh3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的重组菌经发酵培养12h，异戊醇的产量可高达497mg/L，是目前已报道基因工程菌合成异戊醇能力最高的重组菌。

主权项

1.一种高产异戊醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，是将含有核糖体结合位点rbs的α‑酮异戊酸脱羧酶基因kivd和醇脱氢酶基因adh3分别连接在或者串联在表达载体pEC‑XK99E上，然后转化谷氨酸棒杆菌，再敲除谷氨酸棒杆菌的丙酮酸脱氢酶组分基因aceE，或同时敲除谷氨酸棒杆菌的丙酮酸脱氢酶组分基因aceE和乳酸脱氢酶基因ldh，获得高产异戊醇的基因工程菌；所述的含有核糖体结合位点rbs的α‑酮异戊酸脱羧酶基因kivd的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的醇脱氢酶基因adh3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的丙酮酸脱氢酶组分基因aceE的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述的乳酸脱氢酶基因ldh的序列如SEQ ID NO.5所示。