[发明专利]LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物及方法

摘要

本发明公开了一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物及方法，引物包括正向外引物F35'‑CAGGATTTCCTGATCAATG‑3’；反向外引物B35'‑GTGTGAACTCAGATCACGT‑3’；正向内引物FIP5'‑AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC‑AACCAAGTTACCCTAGGGATA‑3’；反向内引物BIP5'‑TACGGCCTCGATGTTGGATC‑AGGACTGTTAATCGTTGAACAA‑3’；方法鱼翅DNA的提取；建立LAMP反应体系；向Loopamp反应试管中分别加入预反应溶液各和待检测样品DNA；混合；将混合物置于LAMP浊度仪反应；采用LAMP浊度仪方法或荧光目测的方法检测检验结果。目的是提供一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物及方法，该方法具有快速、检测灵敏度高、操作简单、结果直接可以判读等特点。

主权项

一种用LAMP技术鉴别鱼翅真伪的方法，其特征在于包括以下步骤：A、鱼翅DNA的提取采用纳米磁珠提取鱼翅DNA；B、建立LAMP反应体系25μL的LAMP反应体系包括20μL预反应溶液和5μL DNA模板，其中20μL预反应溶液，由以下组分组成:2X反应缓冲液12.5μL，引物2‑4μL，荧光目视检测试剂1.0μL，酶溶液1.0μL，去离子水补齐至20μL；所述引物的序列包括：正向外引物F3：5'‑CAGGATTTCCTGATCAATG‑3’；反向外引物B3：5'‑GTGTGAACTCAGATCACGT‑3’；正向内引物FIP：5'‑AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC‑AACCAAGTTACCCTAGGGATA‑3’；其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2序列：F1c：AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC；F2：AACCAAGTTACCCTAGGGATA反向内引物BIP：5'‑TACGGCCTCGATGTTGGATC‑AGGACTGTTAATCGTTGAACAA‑3’所述反向内引物BIP包括含B1c和B2序列：B1c：TACGGCCTCGATGTTGGATC；B2：AGGACTGTTAATCGTTGAACAA；C、向Loopamp反应试管中分别加入上述预反应溶液各20μL；D、在预反应溶液中加入待检测的待检测样品DNA 5μL，使总量达到25μL；E、对照反应中，阴性对照反应使用普通鲤鱼DNA 5μL，空白对照反应使用去离子水5μL，阳性对照使用鱼翅本身提取的DNA 5μL；F、用移液器吸排液法混合，或者合上盖子轻击使溶液充分混合后瞬时离心；G、将混合物置于LAMP浊度仪的反应孔中，于60‑70℃恒温反应90min，最后60‑80℃下保温5min以结束反应；H、采用LAMP浊度仪方法或荧光目测的方法检测检验结果,所述(正向外引物F3+反向外引物B3)：(正向内引物FIP+反向内引物BIP)的浓度比为1:2‑1:10。