[发明专利]LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物,本发明还涉及一种采用上述引物鉴别鱼翅真伪的方法，属于生物技术领域。

背景技术

鱼翅作为我国传统的海产珍品，被誉为“海味八珍”之一，属于高级滋补品，常与燕窝、鲍鱼、海参等相提并论，它是鱼翅是鲨、鳐、鲛的鳍或尾端部分，经过一系列复杂的加工过程精制而成,主要产于日本、墨西哥、巴西、非洲、中东、印度、南美洲及澳洲，我国的东海、南海也有出产，但是我国是主要的进口国，每年进口约3500吨各种形式的鱼翅。

鲨鱼隶属于软骨鱼纲Chondrichthyes、板鳃亚纲Elasmobranchii、鲨目Selachoidei、星鲨属Mustelus，是海洋生物链中最高层的重要鱼类，全世界共有鲨鱼约370种，可是用来割取鱼翅的约20来种,由于其珍贵且稀有，加上市场对它的需求持续的增长，导致各类仿鱼翅、参假鱼翅等泛滥流行，极大地扰乱了我国市场次序，极大地侵害了消费者的权益，甚至危害了消费者的身体健康。急需研究灵敏度高且操作方便适合基层实验室检测的方法来打击假冒伪劣鱼翅产品，以保护消费者的合法权益。

目前国内外已有人报道用PCR和FINS方法来鉴定鱼翅的种类，但存在PCR扩增片段过大难以扩增出来，还有设计的引物范围不宽，存在漏检的可能，而且PCR方法需要昂贵仪器设备，操作复杂。目前制备鱼翅的主要鲨鱼种类包括有犁头沙KJ170949.1:Sphyrna lewini；JX827259.1,Sphyrna lewini；HM239662.1 Sphyrna lewini、平滑锤头鲨KM489157.1 Sphyrna zygaena、公牛鲨KF646785.1 Carcharhinus leucas、灰色真鲨KC470543.1 Carcharhinus obscurus、黑翼鲨KJ720818.1 Carcharhinus melanopterus、白斑星鲨AB015962.1 Mustelus manazo、欧氏尖吻鲨EU528659.1 Mitsukurina owstoni、海洋白鳍鲨AY820736.1 Carcharhinus longimanus、褐星鲨EU099503.1 Mustelus henlei、KJ010763.1 Mustelus henlei、沙虎鲨KF569943.1 Carcharias taurus、大青鲨GU324148.1 Prionace glauca、鼬鲨KF111728.1 Galeocerdo cuvier、姥鲨KF597303.1 Cetorhinus maximus、灰星鲨KF889325.1 Mustelus griseus等鲨鱼。

目前已有的检测方法，其检测步骤繁琐，采用仪器昂贵，不能快速、方便的实现鉴别鱼翅真伪。故此，现有鉴别鱼翅真伪的检测方法有待进一步完善。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物；

本发明另一个目的是提供一种采用上述引物鉴别鱼翅真伪的方法，该方法具有快速、检测灵敏度高、操作简单、结果直接可以判读等特点。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的引物，其特征在于包括：

正向外引物F3：5'-CAGGATTTCCTGATCAATG-3’；

反向外引物B3：5'-GTGTGAACTCAGATCACGT-3’；

正向内引物FIP：

5'-AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC-AACCAAGTTACCCTAGGGATA-3’；

其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2序列：

F1c：AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC；

F2：AACCAAGTTACCCTAGGGATA

反向内引物BIP：

5'-TACGGCCTCGATGTTGGATC-AGGACTGTTAATCGTTGAACAA-3’

所述反向内引物BIP包括含B1c和B2序列：

B1c：TACGGCCTCGATGTTGGATC；

B2：AGGACTGTTAATCGTTGAACAA。

一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪的方法，其特征在于包括以下步骤：

A、鱼翅DNA的提取

采用纳米磁珠提取鱼翅DNA；

B、建立LAMP反应体系