[发明专利]基于实时荧光定量PCR的黔北麻羊FSHR基因组织表达谱的建立方法

摘要

本发明提供了一种基于实时荧光定量PCR的黔北麻羊FSHR基因组织表达谱的建立方法。本发明应用实时荧光定量PCR技术，建立山羊FSHR基因在不同组织中的表达谱，对于阐明FSHR基因表达的作用机理具有一定的指导作用。而且它具有操作简便、快速高效、敏感性高、特异性强及自动化程度高等优点，还有效解决了PCR污染的问题，因此比采用其它方法来建立组织表达谱适应性更强。本发明方法简单，易于实施，成本低廉，使用效果好。

主权项

一种基于实时荧光定量PCR的黔北麻羊FSHR基因组织表达谱的建立方法，其特征在于：采用Trizol法分别提取已屠宰的发情期产单羔和产双羔母羊的5种组织的总RNA，所述的5种组织包括下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫；并对提取的总RNA进行cDNA的反转录合成；以上述cDNA为模板，分别对FSHR和GAPDH进行常规PCR扩增；FSHR上游引物的序列为5’‑ CGAGTCATCCCAGAAGGAG‑3’， FSHR下游引物的序列为5’‑ GGCAGGTTGGAGAACACATT‑ 3’； GAPDH上游引物的序列为5’ ‑CTGACCTGCCGCCTGGAGAAA ‑3’， GAPDH:下游引物的序列为5’ ‑GTAGAAGAGTGAGTGTCGCTT‑ 3’； 回收相应条带并与T‑载体连接，转化DH5α感受态细胞，将鉴定为阳性的重组质粒进行测序，并将获得的重组质粒进行10倍比稀释后，将其作为模板，进行实时荧光定量PCR扩增，获得标准曲线；荧光定量PCR每个样品，并用ddH₂O做阴性对照；采用2^‑△△Ct定量分析方法对山羊FSHR基因在发情期不同组织进行差异表达量分析，构建组织表达谱。