[发明专利]带鱼鱼骨铁螯合胶原肽制备方法

摘要

本发明涉及一种带鱼鱼骨铁螯合胶原肽的制备方法，具体讲是以带鱼鱼骨为原料，采用酸法提取胶原蛋白，利用复合风味蛋白酶和中性蛋白酶对胶原蛋白进行酶解，采用超滤、固定化铁离子亲和层析和反相高效液相色谱分离纯化得到铁螯合胶原肽Gly‑Pro‑Pro‑Gly‑Pro‑Trp‑Gly‑Pro‑His‑Gly，ESI/MS检测分子量为957.99Da。铁螯合胶原肽由于其独特的螯合和转运机制，吸收利用度高，又可同时补充多肽/氨基酸和铁，是一种理想的补铁物质。

主权项

带鱼鱼骨铁螯合胶原肽制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）带鱼鱼骨的预处理：将带鱼鱼骨按照料液比1 g:15～20 mL加入到0.1 mol/L的NaOH溶液于1～4℃下浸泡2～4 h，脱除非胶原蛋白；将经NaOH溶液处理后的带鱼鱼骨用蒸馏水洗涤至中性并沥干，在按照料液比1 g: 5至1g：8 mL加入pH 7.4的EDTA溶液，于1～4℃下浸泡2～3天（每天更换1次EDTA溶液），蒸馏水洗涤2～3次，干燥、粉碎，得脱钙带鱼鱼骨粉；2）带鱼鱼骨胶原蛋白的制备：将脱钙带鱼鱼骨粉按照料液比1 g:5～8 mL加入到0.5 mol/L乙酸溶液并在1～4℃下动态浸泡3 d，10 000g离心20～25 min，取上清液，并加入NaCl至溶液终浓度为1.0 mol/L，静置60～90 min，12 000g离心25～30 min得沉淀物，冷冻干燥即为带鱼鱼骨胶原蛋白；3）带鱼鱼骨胶原蛋白的酶解：将带鱼鱼骨胶原蛋白按照料液比1g:20～25 mL加入到磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液（pH 7.0，0.2 mol/L），按照胶原蛋白质量的1.5～2.0%向溶液中加入复合风味蛋白酶（1 000 LAPU/g），于温度45～50℃酶解4～6 h后，将溶液升温至90～95℃，并于此温度保持10～15min后，冷却至45～50℃；按照胶原蛋白质量的1.2～1.5%向溶液中加入中性蛋白酶（1.0×10⁵ U/g），于温度45～50℃下酶解4～6 h，将溶液升温至90～95℃，并于此温度保持10～15min后，8 000g离心25～30 min，取上清液，即为酶解产物；4）带鱼鱼骨铁螯合胶原肽的制备：将制备的酶解产物采用1 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1 kDa部分，得超滤酶解液，超滤酶解液依次经固定化铁离子亲和层析和反相高效液相色谱纯化，得到带鱼鱼骨铁螯合胶原肽。