[发明专利]从海参生长环境中分离光合细菌及微生态制剂的制备方法

摘要

本发明提供从海参生长环境中分离光合细菌的方法及微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)选取试样；(2)配置富集培养基；(3)光合细菌的富集培养；(4)固体分离培养基板；(5)光合细菌的分离；(6)菌种鉴定；(7)扩大培养；(8)制备微生态制剂。本发明得到深红红螺菌质量优良，调节养殖水体中化学因子，避免有害细菌和条件致病菌大量滋生，制成的微生态制剂大大改善水产养殖产品的水体环境。深红红螺菌在没有有机物的条件下，可利用光能，固定二氧化碳固定有机物；在有有机物的条件下，又可以利用有机物进行生长。深红红螺菌能将养鱼水中的残饵、排泄物等完全分解，具有改善水产养殖生态环境，降低氨氮、BOD的优点。

主权项

从海参生长环境中分离光合细菌的方法，其特征在于：包括以下步骤是：(1)选取海参生长水域的底泥作为试样，放入容器中；(2)配置富集培养基：CH₃COONa1.0‑3.0g，CH₃CH₂COONa0.3‑3g，(NH₄)₂SO₄0.3‑3g，MgSO₄·7H₂O0.5‑2g，K₂HPO₄0.7‑3g，K₂HPO₄0.2‑1克，CaCl₂0.05g，MnSO₄0.0025‑0.0050g，FeSO₄0.005‑0.010g，乙醇2‑5mL，酵母膏0.1‑0.5g，谷氨酸1.0g，蒸馏水定容至1L，调pH至7.5；(3)光合细菌的富集培养：将富集培养基进行高压蒸汽灭菌，然后将海参生长水域的底泥的样品1g置于无菌具塞细颈瓶中，添加经过高压蒸汽灭菌后的富集培养基1L，盖紧瓶盖，将细颈瓶置于SPX‑300I‑G型微电脑光照培养箱中，在光照度为1000～6000lux，温度为15～30℃，无氧，至培养基内出现红色，即获得光合细菌富集培养菌悬液；(4)固体分离培养基板：CH₃COONa3.0‑5.0g，酵母膏3.0‑6.0g，CaCl₂0.3‑1.0g，MgSO₄·7H₂O0.5‑1.0g，调pH至7.4，加入琼脂20‑22g，加水至1L；(5)光合细菌的分离：将光合细菌富集培养菌悬液摇床振荡处理，然后光合细菌富集培养菌悬液滴到固体分离培养基板上，固体分离培养基板上涂布和划线，将涂布后的固体分离培养基平板倒扣至盖内，对培养皿边缘密封，将密封后的培养皿倒置暗处5‑7小时后拿出，再倒置于光照培养箱中，于光照度为1000～6000lux，温度为15～30℃条件下光照厌氧培养；当厌氧培养7天后，平板上长出红色的小型菌落，挑取单个菌落重复划线分离多次，至得到细胞形态一致的菌株；(6)菌种鉴定：对菌株的细胞形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列进行测定；该菌株属于深红红螺菌种；(7)扩大培养：将步骤(6)得到的深红红螺菌进行摇瓶一级液体扩大培养：将菌体置于10L发酵罐，培养完成后，然后将扩大培养得到的菌体进行二级液体扩大培养，即菌体被放置于100L发酵罐培养，然后得到二级液体扩大培养的菌株。