[发明专利]大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法在审
| 申请号： | 201410843982.0 | 申请日： | 2014-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN104498520A | 公开（公告）日： | 2015-04-08 |
| 发明（设计）人： | 马兴元;刘地;郭华;郑文云;王晓丽;李尚洁 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/245;C07K1/22;A61K39/39 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙)31218 | 代理人： | 翟羽 |
| 地址： | 200237*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开一种大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm全毒素的体外制备方法，依次将LTm全基因eltm、LTA、LTB两亚基的基因eltA(+)和eltB(+)以及除去两亚基基因序列中的信号肽序列的eltA(-)和eltB(-)分别载入五个载体中，通过各个重组质粒工程菌的表达量的对比，筛选出高表达量的工程菌，再通过亚基的体外装配以及装配条件的优化进而高效制备LTm。本发明主要运用LTA和LTB各亚基分别优化表达和高效高量制备的基础上在体外进行人工组装成整体蛋白，以克服多亚基复杂蛋白对其整体进行基因表达效能降低的问题，从而促进疫苗黏膜免疫佐剂的高效制备。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 敏感 毒素 突变体 ltm 体外 制备 方法 | ||
【主权项】：
大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，在重组质粒的构建过程中，通过定点突变除去eltm序列中的Nde I酶切位点，将整段基因载入载体中，随后将包含信号肽序列两亚基基因eltA(+)和eltB(+)分别载入两个载体中，最后将不含信号肽序列两亚基基因eltA(‑)和eltB(‑)分别放入两个载体之中，构建pET24a‑eltm、pET24a‑eltA(+)、pET24‑eltB(+)、pET24a‑eltA(‑)与pET24a‑eltB(‑)五个重组质粒，通过各个重组质粒工程菌的表达量的对比，筛选出高表达量的工程菌，再通过亚基的体外装配以及装配条件的优化进而高效制备LTm。
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