[发明专利]大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法

权利要求书

1.大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，在重组质粒的构建过程中，通过定点突变除去eltm序列中的Nde I酶切位点，将整段基因载入载体中，随后将包含信号肽序列两亚基基因eltA(+)和eltB(+)分别载入两个载体中，最后将不含信号肽序列两亚基基因eltA(-)和eltB(-)分别放入两个载体之中，构建pET24a-eltm、pET24a-eltA(+)、pET24-eltB(+)、pET24a-eltA(-)与pET24a-eltB(-)五个重组质粒，通过各个重组质粒工程菌的表达量的对比，筛选出高表达量的工程菌，再通过亚基的体外装配以及装配条件的优化进而高效制备LTm。

2.根据权利要求1所述大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm包括单突变体LTR7K、LTH44A、LTV53D、LTS61F、LTS63K、LTA69G、LTA72R、LTE112K、LTG118E、LTR146E、LTR192G、LTG33D；双突变体LTm(K63/R72)、LTm(R192G/L211A)以及LTB亚单位B₅五聚体。

3.根据权利要求1所述的大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，所述工程菌含有重组表达质粒pET24-eltA(-)和pET24a-eltB(-)。

4.根据权利要求1所述的大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，体外装配时LTA与LTB物质的量比例为1：6—1：8。

5.根据权利要求1所述的大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，体外装配时缓冲液pH为7.8，缓冲液中NaCl为1.2M。

6.根据权利要求1所述的大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，体外装配时持续时间为24小时以上，组装体系存在的温度为4℃。

7.根据权利要求1所述的大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm的体外制备方法，其特征在于，缓冲液中加入5％甘油和0.5M的L-精氨酸。

8.利用权利要求1—7任一所述的制备方法制备获得的大肠杆菌热敏感毒素突变体LTm在制备疫苗佐剂中的应用。