[发明专利]胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法有效
申请号: | 201410680219.0 | 申请日: | 2014-11-25 |
公开(公告)号: | CN104480178B | 公开(公告)日: | 2019-05-03 |
发明(设计)人: | 王培磊;孙业凯 | 申请(专利权)人: | 临沂大学 |
主分类号: | C12P23/00 | 分类号: | C12P23/00;C12R1/89 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 276000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明公开了一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法,属水产养殖领域。以前,雨生红球藻采用环形跑道式水泥池或光生物反应器培养,虾青素产率低,易污染,工艺复杂,操作麻烦,基建投资大,成本高。本发明采用二阶段养殖法,第一阶段在三角烧瓶中培养,设置较低的温度和光照强度,有利于藻细胞生长且避免强光对细胞造成光伤害,第二阶段采用白塑料桶充气培养,提高了温度和光照强度并延长了光照时间,有利于虾青素积累。本发明还对传统培养液配方进行了优化,营养更全面、均衡,成本低,操作灵活、方便,虾青素产量提高120%。 | ||
搜索关键词: | 胁迫 雨生红球藻 快速 积累 虾青素 方法 | ||
【主权项】:
1.一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法,其特征在于具体步骤如下:步骤(1)培养液的准备培养液成分:Ca(NO3)20.4份,NaH2PO40.1份,MgSO4·7H2O 0.05份,CuSO4·5H2O 0.02份,MnCl2·4H2O 0.1份,FeSO4·7H2O 0.04份,尿素0.5份,人尿1份,泛酸钙0.03份,麦饭石粉0.04份,α‑萘乙酸0.002份,肌醇0.001份,叶酸0.004份,尼古丁酸0.001份,维生素H 0.008份,EDTA 0.04份,土壤浸出液1.2份,冷开水1000份;装入棕色磨口塞试剂瓶中,摇匀,密封,置入4℃冰箱保存备用;步骤(2)三角烧瓶培养取一3000毫升三角烧瓶,加入1500毫升步骤1所述培养液,选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的雨生红球藻藻种接种,接种要在上午9‑10点进行,接种密度4万个细胞/每毫升,轻轻摇匀,报纸和橡皮筋封口,放在微藻培养室中进行培养,空调控温,日光灯管提供光照,不充气,调节温度至26℃,光照强度至5000lux,光暗周期=12h/L+12h/D,即提供间歇光,12小时光照,12小时黑暗,每天手动摇瓶3次,每次45秒钟,连续培养7天,转入下一步骤;步骤(3)白塑料桶培养取一65升带盖的大口白塑料桶,市场有售,加入步骤1所述培养液40升,再加入步骤2连续培养7天的藻液1800毫升,轻轻摇动3分钟,盖上盖子,进行培养;盖子上打上2个孔,每个孔直径10毫米,插入2根管子,一根为塑料管,长3米,直径8毫米,一端连接空气压缩机,另一端插入到藻液底部,用以充气,充入混合气体,气体成分=空气98%+纯CO22%,连续不间断充气,气量不宜太大,以让藻细胞浮起不下沉即可;另一根较短,长30厘米,直径10毫米,为比较硬的料管,用以排气;将此塑料桶放入微藻培养室中培养,室内空调控温,日光灯管照明,以打开灯管的数量多少来控制光照强度,提供连续不间断光照,连续培养8天,前4天调节温度至28℃,光照强度18000lux,因塑料桶壁的阻挡和吸收作用,到达藻液的实际光照强度为12000lux,后4天,调节温度至30℃,光照强度20000lux,后转入下一步骤;步骤(4)藻细胞收集取步骤3藻液1000份,加入0.5份甲壳素,充分搅拌15分钟,再加入0.8份明矾,搅拌20分钟,静置、沉淀36小时,弃上清液,取底部红色藻泥,藻细胞收集完毕;步骤1中所述土壤浸出液制备方法:取树林中松散、富含有机质的上层土壤1千克,加自来水5升,煮沸20分钟,将泥浆倒入烧杯中,静置24小时,后吸取上清液,倒入三角烧瓶中,加棉花塞,煮沸15分钟,冷却,静置沉淀12小时,取上清液即得土壤浸出液,装入磨口塞试剂瓶,密封,贴上标签,置于4℃冰箱备用;步骤1中所述人尿制备方法:取一3000毫升三角烧瓶,装入人尿1500毫升,静置,自然发酵48小时,放在电炉上加热,煮沸3分钟,冷却,装入磨口塞棕色试剂瓶,密封,置于4℃冰箱冷藏备用;接种用的雨生红球藻预先进行提纯,以确保接种时藻种为纯种且处于生长旺盛的指数生长期;步骤1中各种营养盐要按配方中提供的顺序加入,以免发生化学反应;步骤1中各种无机营养盐和维生素预先配成母液且置于4℃冰箱冷藏保存备用,放置时间不要超过30天;步骤1和2中所用三角烧瓶等玻璃仪器均需洗刷干净放在85℃烘箱中烘干后使用;步骤2所述接种过程需在上午9‑10点且在无菌操作台上进行;步骤3中所用塑料桶要选用透光性好且韧性强度高,以提高光能利用率和塑料桶使用寿命;步骤1中所用化学药品纯度均需化学纯级别。
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- 2018-09-10 - 2019-01-04 - C12P23/00
- 本发明申请属于藻类培养技术领域,具体公开了一种提高小球藻中类胡萝卜素积累的方法,具体包括以下步骤:(1)培养:培养时采用BG11培养基进行培养,培养基中为氮元素含量为0.25g/L;(2)在步骤(1)中的培养基中添加培养液,培养液中磷元素浓度为0.008g/L;(3)接种:对所述培养液进行小球藻接种;(4)对步骤(3)中的含有小球藻的培养液添加H2O2;(5)对接种后的BG11培养基实施UV辐照。本方法可以提高类胡萝卜素累积的速度和产量,减少代谢产物。
- 利用光合细菌微氧发酵快速生产类胡萝卜素的方法-201510219267.4
- 赵志平;聂鑫;张利;肖长江;赵阳;刘兴波 - 四川理工学院
- 2015-04-30 - 2018-12-11 - C12P23/00
- 本发明公开了利用光合细菌微氧发酵快速生产类胡萝卜素的方法,具体步骤如下:将活化的光合细菌(Rhodobacter sphaeroides)接种至MMS培养基中,好氧培养至OD600为0.6‑0.8,然后调节培养条件至微氧,诱导类胡萝卜素快速大量合成,然后进行提取、纯化,利用本发明方法发酵生产类胡萝卜素的时间短,仅需要36小时,且菌体产量高达6g/L,类胡萝卜素的产量和产率分别是8.287mg/L和1911μg/g,具有良好的清除DPPH自由基的能力,IC50约为8μg/mL。
- 一种利用微藻高效生产虾青素的新方法-201210264946.X
- 李元广;章真;黄建科;范建华;王伟良;侯冬梅;陈杰;王军;沈国敏;李淑兰;孙炳耀 - 上海泽元海洋生物技术有限公司;嘉兴泽元生物制品有限责任公司
- 2012-07-27 - 2018-12-11 - C12P23/00
- 本发明涉及一种利用微藻高效生产虾青素的新方法,该方法包括微藻异养培养、稀释、光诱导培养、藻细胞采收以及虾青素提取等步骤。本发明方法充分发挥了微藻在异养阶段快速生长的优势以及由异养培养所获得的大量藻细胞在光诱导阶段大量积累虾青素的优势,可极大地提高微藻生产虾青素的效率,实现低成本、高效率及大规模培养微藻生产虾青素,为解决源于微藻的虾青素大规模产业化提供重要的技术手段。
- 通过提高红法夫酵母生物量合成虾青素及测定的方法-201810795769.5
- 李纪丰;石英杰;孙常明;武岩峰;蒋海燕;足立胜 - 威海利达生物科技有限公司
- 2018-07-19 - 2018-11-30 - C12P23/00
- 本发明公开了一种通过提高红法夫酵母生物量合成虾青素及测定的方法,合成方法的具体步骤如下:步骤一、摇瓶种子培养:取一环斜面保存的红法夫酵母菌苔培养,得到一代摇瓶种子培养液,再将其扩大培养3~4代,获得摇瓶种子培养液;步骤二、车间种子培养:将摇瓶种子培养液接继续接种、培养,得到车间种子培养液;步骤三、发酵生产:将车间种子培养液继续接种、发酵且发酵培养基添加有番茄粉,得到发酵液。测定方法的具体过程如下:红法夫酵母生物量测定;虾青素含量测定;虾青素产量测定。本发明所提供的方法既提高了虾青素的产量,又节约了生产成本,非常适合工业化发酵生产天然虾青素。
- 一种红法夫酵母发酵生产虾青素的发酵培养基及方法-201810796004.3
- 李纪丰;石英杰;孙常明;陈今朝;赵佳;蒋海燕;足立胜 - 威海利达生物科技有限公司
- 2018-07-19 - 2018-11-27 - C12P23/00
- 本发明公开了一种红法夫酵母发酵生产虾青素的发酵培养基及方法,红法夫酵母发酵生产虾青素的发酵培养基,所述发酵培养基每1L水中,包括以下组分:葡萄糖80~140g、酵母浸粉5~8g、麦芽浸粉5~8g、蛋白胨6~10g、硫酸铵5~9g、硫酸镁0.5~2.5g、番茄粉10~30g和体积分数为0.2~0.5%的无水乙醇。本发明公开了一种利用红法夫酵母高产天然虾青素的培养基和方法,利用本法发酵所得的菌体生物量及虾青素含量高,虾青素的抗氧化能力强,为维E的550倍、β‑胡萝卜素的10倍。虾青素有增强免疫力、抑制肿瘤发生、清除体内自由基等多方面的生理作用,在保健品、医药、化妆品等方面具有广阔的应用前景。
- 一种可提高虾青素产量的红法夫酵母培养方法-201810795724.8
- 李纪丰;石英杰;孙常明;华晓曼;蒋海燕;足立胜 - 威海利达生物科技有限公司
- 2018-07-19 - 2018-11-23 - C12P23/00
- 本发明公开了一种可提高虾青素产量的红法夫酵母培养方法,其整体步骤为:步骤一、摇瓶种子培养;步骤二、摇瓶发酵培养,发酵培养过程置于全程有光或部分有光的光照条件下进行;步骤三、发酵罐培养,发酵罐培养的光照条件与步骤二相同或不同。本发明通过光照条件可显著提高红法夫酵母生产虾青素的产量,对于在工业上采用红法夫酵母高效生产天然虾青素具有重要的研究价值及良好的应用前景。
- 一种利用海洋红酵母高产类胡萝卜素和铜发酵培养方法-201510512641.X
- 王亚楠;程殿林;丛培江;孙梦洁;涂开;杨婷婷;刘敏 - 青岛大学
- 2015-08-17 - 2018-11-09 - C12P23/00
- 本发明提供一种利用海洋红酵母高产类胡萝卜素和铜发酵培养方法,包括如下:所述海洋红酵母WYN1在含铜培养基中发酵培养高效生产类胡萝卜素,发酵培养基组成为葡萄糖1%,酶解玉米粉1‑3%,蛋白胨2.5%,硫酸镁0.02%,磷酸二氢钾0.15%,铜含量150‑200mg/L,氯化钠20%,其余为水;初始pH为8,接种量3‑8%,摇床转速为50‑80r/min,24‑28℃培养10‑15小时后调整温度为16‑20℃进行低温静止培养,停止搅拌,pH调整为3‑5,保持2‑4小时;之后阶梯形升温到24‑30℃,pH调整为4.6‑5.5,按照2.5%的添加量添加蛋白胨,按照2%的量添加酵母粉;摇床转速为50‑100r/min,继续发酵10‑15h。
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