[发明专利]一种抗菌肽制剂及其制备方法及其应用

摘要

本发明公开一种抗菌肽制剂及其制备方法及其应用，该制备方法包括以下步骤A、将抗菌肽产生菌的菌体发酵液浓缩，向浓缩液中加入β环糊精、糊精、阿拉伯胶进行乳化5‑10分钟；B、将混合液输入高速离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，制得半成品颗粒；C、利用硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、丙三醇构成的包衣液在流化床包衣机中对半成品颗粒进行包衣处理，制得成品。发明制备方法工艺简单，成本低廉，可进行大批量规划化生产。且通过本发明的方法制备的抗菌肽制剂包封率高，稳定性好，从而提高了抗菌肽在饲料加工及储存中的稳定性和货架期，也减少了饲料投料时抗菌肽在水体中的溶失，提高了抗菌肽利用率、减少了对水体的污染。

主权项

一种抗菌肽制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：A、将抗菌肽产生菌的菌体发酵液进行浓缩，向浓缩液中加入β环糊精、糊精、阿拉伯胶进行乳化混合5‑10分钟；B、将混合液输入高速离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，制得半成品颗粒；C、利用硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、丙三醇构成的包衣液在流化床包衣机中对半成品颗粒进行包衣处理，制得成品；根据酵母外源蛋白表达密码子偏好性对菌丝霉素核苷酸序列进行优化及人工合成，将人工合成的菌丝霉素核苷酸序列连接到pUC57的Aval和BamH I酶切位点间，构建成含有菌丝霉素目的基因的重组质粒 pUC57‑plectasin，其中菌丝霉素核苷酸序列为:GGTTTTGGTTGTAACGGTCCATGGGATGAAGATGATATGCAATGTCATAACCATTGTAAGTCTATTAAGGGTTACAAGGGTGGTTACTGTGCTAAGGGTGGTTTTGTTTGTAAGTGTTAC；用Aval和BamH I双酶切重组质粒pUC57‑Plectasin得到菌丝霉素基因片段并连接到毕赤酵母表达载体 pPicZaMF57的多克隆位点，并位于 α 因子信号肽序列的下游，构建成含有菌丝霉素目的基因的重组表达载体pPicZaMF57‑plectasin；所述抗菌肽产生菌为毕赤酵母重组菌 GS115/pPicZaMF57‑PLE118，该抗菌肽的氨基酸序列为GFGCNGPWDEDDMQCHNHCKSIKGYKGGYCAKGGFVCKCY；所述步骤A具体为：A1、将抗菌肽产生菌的菌体发酵液浓缩，形成固含量为30‑40%的浓缩液；A2、向浓缩液中加入质量分数10‑20%的β环糊精、质量分数1‑2%的糊精、质量分数5‑10%的阿拉伯胶后利用高剪切乳化泵在2000‑2500转/分钟的条件下混合5‑10分钟；所述高速离心喷雾干燥机的设定条件为：雾化盘转速为3000‑5000转/分钟、进风温度为140‑160℃，混合液的进料量为800‑1100千克/小时；利用震荡筛收集对喷雾干燥后形成的半成品颗粒进行筛分，控制所收集的半成品颗粒粒径范围为350‑850μm；所述包衣液是由质量分数为80‑90%的硬脂酸、质量分数9‑18%的单硬脂酸甘油酯及质量分数为1‑2%的丙三醇组成；所述步骤C具体为：C1、将筛分合格后的半成品颗粒输入到流化床包衣机中，每次装料量为200kg；C2、将包衣液的加热至70‑100℃进行融化，并将融化好包衣液利用保温泵泵入流化床包衣机中对半成品颗粒进行包衣处理，其中，控制流化床包衣机中包衣液喷雾速度为200‑300克/分钟，进风温度为16‑20℃，出风温度为30‑40℃；融化好的包衣液暂存于包衣液配料罐中，包衣处理时，通过保温泵将包衣液配料罐中的包衣液泵入流化床包衣机，其中，该包衣液配料罐在包衣处理过程中始终进行加热保温，使包衣液温度始终保持在70‑80℃。