[发明专利]一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型和6型三重PCR检测方法、试剂盒及其应用

摘要

本发明涉及一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型，3型和6型三重PCR检测方法、试剂盒及其应用，该方法包括猪传染性胸膜肺炎临床菌株的DNA提取；PCR产物扩增，包括在PCR试剂管中加入反应液，包括10×PCRbuffer的PCR缓冲液、MgCl₂、TaqDNA聚合酶、dNTPs和2型、3型和6型三对特异性异物，以提取的DNA为模板，反应液总体积为50μl；最后对扩增产物检测。该方法特异性强、灵敏度高、操作简便、省工省时，能同时满足检测多种血清型基因的需求，提高了检测的准确性和特异性。本发明能快速、方便的检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型，3型和6型，可用于细菌鉴定、疾病诊断、临床疫苗筛选和分子流行病学调查与分析，具有广阔的市场前景和较大的经济效益。

主权项

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型和6型的三重PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： (1)猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型和6型临床菌株的DNA提取； (2)PCR产物扩增：扩增体系的建立，在PCR试剂管中加入反应液，反应液包括10×PCR buffer的PCR缓冲液、MgCl₂、Taq DNA聚合酶、dNTPs以及2型、3型和6型三对特异性异物，以步骤(1)提取的DNA为模板，反应液总体积为50μl，扩增体系的具体组成如下： 组成成分 加入体积数 最终浓度 10×PCR buffer 10μl 1×PCR buffer MgCl₂6μl 25mM dNTPs 1μl 10mM Ap₂F 2.5μl 5mM Ap₂R 2.5μl 5mM Ap₃F 3μl 5mM Ap₃R 3μl 5mM Ap₆F 2μl 5mM Ap₆R 2μl 5mM Taq 0.25μl   H₂O 17.75μl   其中的三对特异性引物如下： (3)扩增产物检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下观察结果。