[发明专利]一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型和6型三重PCR检测方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型和6型的三重PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： 

(1)猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型和6型临床菌株的DNA提取； 

(2)PCR产物扩增：扩增体系的建立，在PCR试剂管中加入反应液，反应液包括10×PCR buffer的PCR缓冲液、MgCl₂、Taq DNA聚合酶、dNTPs以及2型、3型和6型三对特异性异物，以步骤(1)提取的DNA为模板，反应液总体积为50μl，扩增体系的具体组成如下： 

组成成分 加入体积数 最终浓度 10×PCR buffer 10μl 1×PCR buffer MgCl₂6μl 25mM dNTPs 1μl 10mM Ap₂F 2.5μl 5mM Ap₂R 2.5μl 5mM Ap₃F 3μl 5mM Ap₃R 3μl 5mM Ap₆F 2μl 5mM Ap₆R 2μl 5mM Taq 0.25μl   H₂O 17.75μl  

其中的三对特异性引物如下： 

(3)扩增产物检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下观察结果。