[发明专利]一种有机酸高产菌株的高通量筛选方法有效
申请号: | 201410583352.4 | 申请日: | 2014-10-27 |
公开(公告)号: | CN104357539B | 公开(公告)日: | 2018-02-23 |
发明(设计)人: | 周景文;陈坚;曾伟主;李江华;堵国成 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12Q1/04 | 分类号: | C12Q1/04;C12R1/645 |
代理公司: | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人: | 张勇 |
地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种有机酸高产菌株的高通量筛选方法,属于微生物技术领域。本发明通过pH指示剂结合高通量筛选,能够从大量菌株中筛选获得有机酸产量相对较高的菌株,简化了整个筛选过程和提高了筛选效率。本发明还将pH指示剂结合的高通量筛选与常规育种方法相结合,获得了一株α‑酮戊二酸的高产菌株,相较于原始菌,该菌株的产量在摇瓶上提高了51.8%,在3L发酵罐上提高了45.4%。 | ||
搜索关键词: | 一种 有机酸 高产 菌株 通量 筛选 方法 | ||
【主权项】:
一种有机酸高产菌株的高通量筛选方法,是先将待筛选菌株于含有变色范围包含了pH2.6~5.2中的任一pH值的pH指示剂的培养基中进行初筛,选取变色圈较大的菌株于高通量孔板中发酵后,再加入变色范围包含了pH 1.4~3.2的任一pH值的pH指示剂进行复筛,选取变色较大的菌株进行发酵验证;所述方法是先用含有溴甲酚绿或百里酚蓝或刚果红的培养基对待筛选菌株进行初筛,挑选变色圈较大的菌落,于高通量孔板中发酵后,取发酵液上清,加入喹哪啶红指示剂进行复筛,选取变色较大的菌株进行发酵验证;其中,加入喹哪啶红pH指示剂的量为上清体积的1/50;上清中α‑酮戊二酸的量为0.6g/L‑4.8g/L;所述有机酸是α‑酮戊二酸,所述菌株为解脂亚洛酵母。
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