[发明专利]一种灰葡萄孢的早期快速分子检测方法

摘要

本发明公开了一种灰葡萄孢的早期快速分子检测方法，其步骤（1）运用2对特异性引物对待鉴定菌株的基因组DNA进行LAMP扩增，所述的2对特异性引物的序列是BC‑F3；BC‑B3；BC‑FIP；BC‑BIP；（2）利用上述引物在恒温条件下，进行LAMP扩增，取琼脂糖凝胶电泳分析或用染料法进行观察；（3）进行结果判断，观察电泳结果是否有梯形条带出现或加入染料后产物是否为绿色，如果有梯形条带出现或产物为绿色，说明DNA来源为灰葡萄孢，如果没有梯形条带出现或产物不变色，说明DNA来源不是灰葡萄孢。实现了对灰霉病发病早期的快速检测，准确的预测预报。检测灰霉病，具有操作简单易行、耗时短、灵敏度高、特异性强，结果判断简单可靠，具有广泛的实际应用价值。

主权项

一种灰葡萄孢的早期快速分子检测方法，其步骤是：(1)通过RAPD方法扩增获得的灰葡萄孢特异性片段为靶标，利用在线软件Primer Explorer 5.0设计LAMP引物，每一组LAMP引物包括两条外引物F3，B3，上游内引物FIP，下游内引物BIP，所述的2对特异性引物的序列分别是：BC‑F3：5’‑AATGATCGCCTACACAGC‑3’BC‑B3：5’‑AGCTACCACCGAGAACAA‑3’BC‑FIP：5’‑TCCCCTTAATAAATGTGATAGGCACCTGAACCGAAAGATTGAAAAGG‑3BC‑BIP：5’‑TTAAGTGACACTTGATGAACGGATCGTTTTATAATCACGAATATGACAG‑3’；(2)利用步骤(1)的引物在恒温条件下，进行LAMP扩增，取5μL产物于2.0％质量体积比的琼脂糖凝胶电泳分析或用染料法进行观察；(3)进行结果判断，观察电泳结果是否有梯形条带出现或加入染料后产物是否为绿色，有梯形条带出现或产物为绿色，DNA来源为灰葡萄孢，没有梯形条带出现或产物不变色，DNA来源不是灰葡萄孢。