[发明专利]一种发酵乳制品中乳酸菌的检测方法

摘要

本发明涉及一种发酵乳制品中乳酸菌的检测方法。该检测方法包括以下步骤：先对样品进行细菌培养，再对培养菌落进行革兰氏染色，并在显微镜下观察细菌形态，然后制备菌悬液，离心，制备待测样品溶液，再进行DNA提取，最后进行PCR扩增及电泳检测，观察检测结果，若电泳检测出现唯一一条PCR扩增条带，判断为阳性，若出现了该条带的同时也出现了其他条带，判断为阴性，且继续对PCR扩增产物进行illuminagenomeanalyzer测序，测得序列登陆NCBI主页进行BLAST对比分析。本发明先行革兰氏染色及生物显微镜观察，可对样品中乳酸菌进行初步筛选与分离鉴定，再采用PCR扩增及凝胶电泳从分子水平上对乳酸菌鉴定其种属，检测结果准确。

主权项

一种发酵乳制品中乳酸菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）细菌培养：取5‑10ml样品加入10‑20ml灭菌水中稀释震荡混匀，平板涂片于MRS培养基中，恒温培养12‑24h，取样品菌落；（2）取步骤（1）中取的菌落进行革兰氏染色，并在显微镜下观察细菌形态；（3）将步骤（1）中的菌落加入10‑20ml PBS缓冲液中，制成菌悬液，将菌悬液取1.5ml加入离心管中，加入等体积的氯仿，混匀2‑5min，离心，取上清液,加无菌水或TE缓冲液500‑700ul混匀重悬，离心，取上清液作为待测样品溶液；（4）DNA提取：取步骤（3）中制得的待测样品溶液至另一离心管中，采用酚氯仿抽提2次，加入0.1倍体积的醋酸钠及1倍体积的异丙醇沉淀DNA，再采用体积浓度为70%‑80%的乙醇溶液洗涤沉淀2次，自然干燥，加双蒸水溶解，得样品DNA模板；（5）PCR扩增：将步骤（4）中提取的DNA模板进行DNA扩增；（6）对步骤（5）中PCR扩增产物进行琼脂凝胶电泳检测，观察检测结果。