[发明专利]一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法，将待测的1头或几头蓟马放置到画好分隔的硝酸纤维素膜上，加2µl样品处理缓冲液，用移液枪头将蓟马磨碎于缓冲液中，依次处理不同虫体样品，同样吸取2µl阳性和阴性对照液点在硝酸纤维素膜上；待膜干燥后，用PBST缓冲液配制的5%脱脂奶粉封闭1h,再加入封闭液稀释的一抗培育1h,之后洗膜3次；加入封闭液稀释的二抗培育1h，再洗膜3次；加入显色液显色15min，弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应，即可进行结果分析。本发明操作方便、快速、测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性，能满足蓟马体内番茄斑萎病毒的检测需要，为尽量避免番茄斑萎病毒的危害奠定了基础。

主权项

一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法，其特征在于包括前处理、检测、结果分析步骤，具体包括：A、前处理：将待测蓟马放置到硝酸纤维素膜上，加入样品处理缓冲液，磨碎，用同方法处理带毒蓟马和无毒蓟马，记录各样品和阴阳性对照的位置；B、检测：将经前处理后的硝酸纤维素膜干燥后，置于容器内，加入封闭液浸没0.5~1.5h，弃去封闭液，加入用封闭液稀释的番茄斑萎病毒单克隆或多克隆抗体，反应0.5~1.5h，弃去番茄斑萎病毒单克隆或多克隆抗体，用PBST缓冲液洗涤硝酸纤维素3~4次，再加入用封闭液稀释的碱性磷酸酶标记的第二抗体，反应0.5~1.5h，弃去碱性磷酸酶标记的第二抗体，用PBST缓冲液洗涤硝酸纤维素膜3~4次，加入显色缓冲液浸没5~6min，弃去显色缓冲液，加入显色液反应15~30min，弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应；C、结果分析： 终止显色反应后即可进行结果分析，阳性对照样品上样液所点斑点显现黑褐色或红色，阴性对照样品上样液所点斑点无颜色变化时，表明检测正常完成；检测样品上样液所点斑点显现黑褐色或红色，表明该检测样品带有所测病毒，即该检测样品中的蓟马带有所测病毒，检测样品上样液所点斑点无颜色变化，表明该检测样品不带有所测病毒，即该检测样品中的蓟马不带有所测病毒。