[发明专利]一种提高大肠杆菌发酵生产番茄红素产量的方法有效
| 申请号： | 201410311356.7 | 申请日： | 2014-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN104073459B | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 黄磊;濮悦;徐志南;蔡谨 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高大肠杆菌发酵生产番茄红素产量的方法，包括以下步骤制备产番茄红素的大肠杆菌菌株，将大肠杆菌菌株中的野生型crp基因克隆到pKSC质粒上，得到重组载体pKSC‑crp，通过碱基替换得到优化的重组载体pKSC‑crp1；最后用pKSC‑crp1中的crp1基因替换野生型crp基因，得到番茄红素高产量的菌株。本发明通过对大肠杆菌菌株中的野生型crp基因的碱基替换A26T，影响其所调控的各种基因的转录水平，调节番茄红素合成直至整个菌体的代谢网络，进而提高番茄红素在大肠杆菌中的合成能力。此方法能有效提高大肠杆菌合成番茄红素的能力，对利用大肠杆菌工业化生产番茄红素具有重要的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 大肠杆菌 发酵 生产 番茄 产量 方法 | ||
【主权项】：
一种提高大肠杆菌发酵生产番茄红素产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备产番茄红素的大肠杆菌菌株：crtE、crtB、crtI是合成番茄红素所需的酶，将这三种酶的基因通过同源重组转入大肠杆菌BW25113，得到产番茄红素的大肠杆菌菌株BW25113‑BIE；（2）将大肠杆菌菌株中的野生型crp基因克隆到pKSC质粒上，得到重组载体pKSC‑crp；野生型crp的基因序列如SEQ ID NO.1所示，野生型crp的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，pKSC质粒的基因序列如SEQ ID NO.3所示，重组载体pKSC‑crp的基因序列如SEQ ID NO.4所示；（3）碱基替换：将步骤2得到的重组载体pKSC‑crp上的crp基因进行碱基替换：A26T，得到优化的重组载体pKSC‑crp1；crp1的基因序列如SEQ ID NO.5所示，crp1 的氨基酸序列如SEQ ID NO.6 所示，pKSC‑crp1的基因序列如SEQ ID NO.11所示；（4）用pKSC‑crp1中的crp1基因替换步骤1得到的产番茄红素的大肠杆菌菌株BW25113‑BIE中的野生型crp基因，得到番茄红素高产量的菌株BW25113‑BIE crp::crp1。
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