[发明专利]用于检测华法林与氯吡格雷个体化用药相关基因的多态性的试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种华法林与氯吡格雷个体化用药相关基因多态性检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒包括通用芯片、引物组合物甲和引物组合物乙；引物组合物甲中的每个引物组合物单元用于鉴别华法林耐药性相关基因的一个多态性位点；引物组合物乙中的每个引物组合物单元用于鉴别氯吡格雷耐药性相关基因的一个多态性位点。本发明的试剂盒具有集成化程度高、灵敏度高、应用范围广、特异性高、检测结果稳定、可靠性高、使用方法快速简便、可操作性强、易于实现自动化等优点，可用于基因突变检测、基因多态性分析等方面，适用于临床疾病突变检测、药物基因组学分析、法医学鉴定等基因分析领域。

主权项

1.一种用于检测华法林耐药性相关基因的多态性和氯吡格雷耐药性相关基因的多态性的试剂盒，包括通用芯片、用于鉴别华法林耐药性相关基因的多态性的引物组合物甲和用于鉴别氯吡格雷耐药性相关基因的多态性的引物组合物乙；所述引物组合物甲包括五个引物组合物单元，每个引物组合物单元用于鉴别华法林耐药性相关基因的一个多态性位点；所述引物组合物乙包括四个引物组合物单元，每个引物组合物单元用于鉴别氯吡格雷耐药性相关基因的一个多态性位点；每个所述引物组合物单元由两条特异性引物和一条共用引物组成，其中一条特异性引物和所述共用引物的组合用于扩增野生型基因，另一条特异性引物和所述共用引物的组合用于扩增突变型基因；所述特异性引物由Tag序列和靶序列区段组成；所有所述特异性引物的5′末端具有不同的Tag序列；所有所述Tag序列两两之间的Tm值之差均小于等于5℃；所有所述Tag序列之间、所有所述Tag序列与所有特异性引物的靶序列区段之间没有交叉杂交且无发夹结构；所有所述Tag序列与含有所述基因的物种的基因组的同源性较低；所述同源性较低是指连续匹配或相同的核苷酸数小于10个；所述通用芯片上设有与所述Tag序列一一对应的Tag探针，每条Tag探针上具有与其相对应的Tag序列；所述引物组合物甲由如下引物组合物单元组成：第一个引物组合物单元、第二个引物组合物单元、第三个引物组合物单元、第四个引物组合物单元和第五个引物组合物单元；所述引物组合物乙由如下引物组合物单元组成：第六个引物组合物单元、第七个引物组合物单元、第八个引物组合物单元和第九个引物组合物单元中；第一个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag1序列‑CTGAAAAACAACCATTGTCCG，另一条特异性引物为Tag2序列‑CTGAAAAACAACCATTTGCCA，共用引物的序列为TCAAGTGGTTCTCGTGCCTC；第二个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag3序列‑GACCTCCCATCCTAGTCCAACA，另一条特异性引物的序列为Tag4序列‑GACCTCCCATCCTAGTCCAATG，共用引物的序列为AGGTCTAAGATGAAAAGCAGGGC；第三个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag5序列‑GCACGAGGTCCAGAGATCCA，另一条特异性引物的序列为Tag6序列‑TGCACGAGGTCCAGAGATATC，共用引物的序列为CACCCGGTGATGGTAGAGG；第四个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag7序列‑CAGGGTCCGGCCACTC，另一条特异性引物的序列为Tag8序列‑CAGGGTCCGGCCACTT，共用引物的序列为GACATTGTGCTCCCAGACGG；第五个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag9序列‑CCCAGAAGACTCAGAGAACCAG，另一条特异性引物的序列为Tag10序列‑GCCCAGAAGACTCAGAGACACAA，共用引物的序列为TGAACTACTGGGCTAAGGGGAC；第六个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag11序列‑CCCACTATCATTGATTATTTCCG，另一条特异性引物的序列为Tag12序列‑CCACTATCATTGATTATTGCCCA，共用引物的序列为GCAATCAATAAAGTCCCGAGG；第七个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag13序列‑GATTGTAAGCACCCCCAGG，另一条特异性引物的序列为Tag14序列‑AGGATTGTAAGCACCCCATGA，共用引物的序列为CACCCCATGGCTGTCTAGG；第八个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag15序列‑ACTTGTGTCTTCTGTTCTCAAAGC，另一条特异性引物的序列为Tag16序列‑TTTGTGTCTTCGGTTCTCAAAGT，共用引物的序列为ACACGTGAAGGCAGGAATTG；第九个引物组合物单元中：一条特异性引物的序列为Tag17序列‑CCTCCCTCCTTCTCCATTTAC，另一条特异性引物的序列为Tag18序列‑CCTCCCTCCTTCTCCATGGAT，共用引物的序列为TTCAGCTCTGTCCGATCTGG；所述通用芯片上包括如下18个探针：Tag1探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag1序列；Tag2探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag2序列；Tag3探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag3序列；Tag4探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag4序列；Tag5探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag5序列；Tag6探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag6序列；Tag7探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag7序列；Tag8探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag8序列；Tag9探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag9序列；Tag10探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag10序列；Tag11探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag11序列；Tag12探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag12序列；Tag13探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag13序列；Tag14探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag14序列；Tag15探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag15序列；Tag16探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag16序列；Tag17探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag17序列；Tag18探针的序列为NH2‑TTTTTTTTTTTTTTT‑Tag18序列；所述Tag1序列至所述Tag18序列依次如序列表的序列1至序列表的序列18所示。