[发明专利]一种利用皮状丝孢酵母制备生物柴油的方法

摘要

一种利用皮状丝孢酵母制备生物柴油的方法,先制备微生物油脂，即以菊糖提取液为产脂培养基，皮状丝胞酵母为产油脂菌种，在一定培养条件下分批发酵培养，经干燥、提取获得微生物油脂，然后再制备生物柴油，即以微生物油脂为原料，在催化剂作用下，经微波加热，与甲醇进行转酯化反应制得生物柴油。本发明采用菊芋提取液进行发酵生产微生物油脂，既解决了采用菊粉生产油脂需添加酵母膏、蛋白胨和无机盐而导致油脂生产成本过高的缺点，显著降低了生物柴油生产的成本，又充分利用了菊芋资源，而且建立的微波加热制备生物柴油的生产工艺操作简便、环境友好、反应速度快，生物柴油产率高、易于控制，具有良好的工业化应用前景。

主权项

一种利用皮状丝孢酵母制备生物柴油的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）菊糖提取液的制备取鲜菊芋经切片，烘干粉碎后，过100目筛制得菊芋粉，称取一定量菊芋粉溶于蒸馏水中，料水重量比为1:9，经85 ℃水浴保温80min后，在离心机中以4000r/min的转速离心10min，除去沉淀，取上清液即为菊糖提取液，备用；2）产脂培养基制备将步骤1）制备的菊糖提取液的pH值调节至4.6，向其中加入菊糖外切酶，酶的添加量为20U/g菊糖提取液，在55℃的条件下保温酶解8h，酶解后，调节其pH值为5.5，然后将酶解液在115℃的条件下灭菌30min即制得产脂培养基，备用；3）皮状丝孢酵母油脂制备将步骤2）中制备好的产脂培养基中接入皮状丝孢酵母，接种量为10％，然后在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养96h后，以4000r/min的转速离心分离后得到富含油脂的皮状丝孢酵母菌体；将得到的皮状丝孢酵母菌体于80℃干燥箱中烘至恒重，采用酸热法提取得到皮状丝孢酵母油脂，备用；4）取一定量步骤3）中制备的皮状丝孢酵母油脂置于单口烧瓶中，在微波炉中微波辐射一定时间以除去水分，称取反应所需的氢氧化钠溶解于一定量的无水甲醇中，配制成催化剂甲醇溶液，所述的催化剂用量为皮状丝孢酵母油脂质量的1%，醇油摩尔比为6:1，将配制好的催化剂甲醇溶液倒入烧瓶内，然后将烧瓶放入微波炉进行加热，所述的微波功率为400W，加热时间为1.0～3.0min，搅拌进行反应，待反应结束后，加入1mol/L的盐酸中和催化剂使反应终止；将反应后的混合物置于分液漏斗中，静置分层，上层为生物柴油与甲醇的混合物，下层为甘油相，取上层相在常压下进行70℃蒸馏，使甲醇分离，将蒸馏后的酯相置于分液漏斗中，从分液漏斗上方倒入50℃的蒸馏水，以洗去少量的皂和其他可溶物，然后再置于微波炉中，用400W功率加热5min后取出静置10min，重复上述蒸馏分离甲醇、水洗和加热操作两次，最后再用质量分数10%的无水硫酸钠除去残余水分，即得到透明、浅黄色的生物柴油。