[发明专利]一种用于Gateway克隆系统的表达载体在审
| 申请号： | 201410098146.4 | 申请日： | 2014-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN104250653A | 公开（公告）日： | 2014-12-31 |
| 发明（设计）人： | 高俊山;吴楠;巫飞飞;孟艳;蔡永萍;林毅 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 230036 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于Gateway克隆系统的表达载体，通过将双HA标签序列片段与具有Gateway阅读框B片段的载体pART27-35Sa-GWB连接得到并在大肠杆菌中转化表达。本发明构建方法所得表达载体可以用于克隆的目的基因或其他来源的目的DNA片段的功能分析和蛋白表达，其方法具有快速、灵活、高效、省时、省力等优点，在基因功能研究方面有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 gateway 克隆 系统 表达 载体 | ||
【主权项】：
一种用于Gateway克隆系统的表达载体，其特征在于其构建方法包括下述步骤：1)使用限制性内切酶Not I分别酶切pART7载体质粒DNA和pART27双元载体质粒DNA，将pART7载体质粒DNA酶切片段插入到pART27双元载体质粒DNA酶切片段中，得到pART27‑35Sa载体质粒DNA；将该pART27‑35Sa载体质粒DNA通过限制性内切酶Sma I进行酶切，插入Gateway阅读框B片段，得到表达载体pART27‑35Sa‑GWB；2)使用引物从表达载体pART7‑DHA中扩增出90bp的双HA标签序列片段：5‑AAGCTTGGAGGTACTGGAGGATCCTACCCATACGACGTTCCAGACTACGCTGGTTACCCATACGACGTTCCAGACTACGCTTGATCTAGA‑3；3)将双HA片段和pART27‑35Sa‑GWB分别用HindIII和Xba I进行双酶切后连接，然后转化到大肠杆菌进行表达和筛选，从阳性克隆中提取质粒DNA进行酶切和测序，获得用于Gateway克隆的表达载体pART27‑35Sa‑GWB‑DHA。
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