[发明专利]一种用于Gateway克隆系统的表达载体

权利要求书

1.一种用于Gateway克隆系统的表达载体，其特征在于其构建方法包括下述步骤：

1)使用限制性内切酶Not I分别酶切pART7载体质粒DNA和pART27双元载体质粒DNA，将pART7载体质粒DNA酶切片段插入到pART27双元载体质粒DNA酶切片段中，得到pART27-35Sa载体质粒DNA；将该pART27-35Sa载体质粒DNA通过限制性内切酶Sma I进行酶切，插入Gateway阅读框B片段，得到表达载体pART27-35Sa-GWB；

2)使用引物从表达载体pART7-DHA中扩增出90bp的双HA标签序列片段：5-AAGCTTGGAGGTACTGGAGGATCCTACCCATACGACGTTCCAGACTACGCTGGTTACCCATACGACGTTCCAGACTACGCTTGATCTAGA-3；

3)将双HA片段和pART27-35Sa-GWB分别用HindIII和Xba I进行双酶切后连接，然后转化到大肠杆菌进行表达和筛选，从阳性克隆中提取质粒DNA进行酶切和测序，获得用于Gateway克隆的表达载体pART27-35Sa-GWB-DHA。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述步骤1)的将pART7载体质粒DNA酶切片段按照花椰菜花叶病毒35S启动子和章鱼碱合成酶基因3非编码区与报告基因NPT II方向相同的顺序插入到pART27双元载体质粒DNA酶切片段中，得到pART27-35Sa载体。

3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述步骤1)的把Gateway阅读框B片段插入到pART27-35Sa载体质粒DNA酶切片段中，得到表达载体pART27-35Sa-GWB。

4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述步骤2)的引物序列为

PR1：

5-ATAAGCTTGGAGGTACTGGAGGATCCTACCCATACGACGTTCCAGACTACGCTGGTTA-3；

PR2：

5-ATTCTAGATCAAGCGTAGTCTGGAACGTCGTATGGGTAACCAGCGTAGTCTGGAACGT-3。