[发明专利]干腐病马铃薯块茎中单端孢霉烯族毒素的提取纯化和检测分析方法

摘要

本发明公开了一种干腐病马铃薯块茎中单端孢霉烯族毒素的提取纯化和检测分析方法，以解决现有气相色谱和高效液相色谱检测中存在杂峰较多，受基质干扰严重的问题。该方法通过人工损伤接种马铃薯块茎，使其产生干腐病，然后将干腐病组织粉碎后用乙腈水振荡提取，然后对提取液进行纯化，再采用UPLC-MS/MS进行检测。本发明的优点在于：所采用的提取纯化方法使样品中的杂质相对较少，无需经常更换保护柱；采用UPLC-MS/MS，选择目标物质的离子碎片，避免了杂质峰的干扰，同时还省去了繁琐的衍生化步骤；可同时对A型和B型单端孢霉烯族毒素中的T-2，DAS,3ADON，Fus-X进行定性定量检测。

主权项

一种干腐病马铃薯块茎中单端孢霉烯族毒素的提取纯化方法，其特征在于它包括以下步骤：A、样品预处理：选取外观整齐，无病虫危害的马铃薯块茎，消毒，然后用无菌水冲洗，过夜晾干；然后在马铃薯块茎上打2‑3个接种孔，去除其中的块茎组织，立即向接种孔中接种硫色镰刀菌（Fusarium sulphureum）的菌饼，被接种的马铃薯置于无菌塑料袋中5℃温度下孵育60d，接着切取马铃薯块茎的病部组织，置于零下80℃的冰箱中冷藏待用；B、样品的提取：取出冷藏的霉心病病部组织，粉碎后称取5.0g于50mL的离心管中，加入25mL乙腈水溶液，乙腈与水的体积比为84:16，漩涡均质3min，4℃温度下离心5min，离心机最大相对离心力为11000×g，上清液过滤转入150mL容量瓶中，下层沉淀用如上的方法重复提取两次，合并前3次的上清液于圆底烧瓶中，在60℃温度下旋转蒸发至近干，再用氮气流吹干，接着用4mL乙腈水溶液溶解，乙腈与水的体积比为84:16，经规格为4mL的priboFast M270的净化柱进一步纯化，将待纯化液体转入净化柱中，然后在30s之内迅速推下活塞，让溶液通过净化柱，得洗脱液；再将洗脱液减压旋转蒸发至近干，残留物通过氮气流吹干后复溶于1mL的流动相中，最后通过0.22微米的微孔滤膜，上机待测。