[发明专利]西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法，所述检测试剂是针对以西尼罗病毒E基因的保守片段为靶目标的，包括一对特异性引物、一条特异性探针和一条内标探针。试剂盒包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、DEPC-H₂O、阳性质控品、阴性质控品、定量用标准品和假病毒内标溶液；其中PCR混合液中含有一对特异性引物、一条特异性探针和一条内标探针。检测方法包括：总RNA提取、反应组分配制、标准品稀释制作标准曲线、扩增、结果判定。本发明的试剂和试剂盒特异性强、灵敏度高、无污染、高通量、可对低含量西尼罗病毒感染、隐性感染或持续带毒宿主进行准确检测，检测方法快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品。

主权项

一种西尼罗病毒的荧光定量RT‑PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂是针对以西尼罗病毒E基因的保守片段为靶目标的，包括：引物：WNV‑PF909：5′‑CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAA‑3′WNV‑PR999：5′‑GATAGGAACTTTGCAAGGTCCA‑3′探针：WNV‑PB941：5′‑CTCCCGCAGACACAGGTCACGGC‑3′内标探针： WNV‑PBIC ：5′‑CTGCAGGCAACGCAGCCGTCACC‑3′，所述探针和内标探针的5′端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述探针和内标探针的3′端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团；所述西尼罗病毒E基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为：CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAAGTTTCTTGGGACTCCCGCAGACACAGGTCACGGCACTGTGGTGTTGGAATTGCAGTACACTGGCACGGATGGACCTTGCAAAGTTCCTATC。