[发明专利]西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂是针对以西尼罗病毒E基因的保守片段为靶目标的，包括：

引物：WNV-PF909：5′-CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAA-3′

WNV-PR999：5′-GATAGGAACTTTGCAAGGTCCA-3′

探针：WNV-PB941：5′-CTCCCGCAGACACAGGTCACGGC-3′

内标探针： WNV-PBIC ：5′-CTGCAGGCAACGCAGCCGTCACC-3′，

所述探针和内标探针的5′端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述探针和内标探针的3′端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团；

所述西尼罗病毒E基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为：

CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAAGTTTCTTGGGACTCCCGCAGACACAGGTCACGGCACTGTGGTGTTGGAATTGCAGTACACTGGCACGGATGGACCTTGCAAAGTTCCTATC。

2.根据权利要求1所述的西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂，其特征在于，所述探针5′端标记的荧光报告基团是FAM，所述探针的3′端标记的荧光淬灭基团为BHQ1；所述内标探针的5′端标记的荧光报告基团是HEX，所述内标探针的3′端标记的荧光淬灭基团为BHQ1。

3.根据权利要求1所述的西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括作为内标的假病毒，用于制作所述假病毒的内标核苷酸序列为：

CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAAGTTTCTTGGGACTGCAGGCAACGCAGCCGTCACCACTGTGGTGTTGGAATTGCAGTACACTGGCACGGATGGACCTTGCAAAGTTCCTATC。

4.一种西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、AMV酶、DEPC-H₂O、阳性质控品、阴性质控品、定量用标准品和假病毒内标溶液；

其中，所述PCR混合液中包含：

引物：WNV-PF909：5′-CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAA-3′

WNV-PR999：5′-GATAGGAACTTTGCAAGGTCCA-3′

探针： WNV-PB941：5′-CTCCCGCAGACACAGGTCACGGC-3′

所述假病毒内标溶液中包含：内标核苷酸序列制作的假病毒；

所述探针和内标探针的5′端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述探针和内标探针的3′端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团；

所述引物和探针对应于西尼罗病毒E基因的保守片段，所述西尼罗病毒E基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为：

CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAAGTTTCTTGGGACTCCCGCAGACACAGGTCACGGCACTGTGGTGTTGGAATTGCAGTACACTGGCACGGATGGACCTTGCAAAGTTCCTATC。

5.根据权利要求4所述的西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述探针5′端标记的荧光报告基团是FAM，所述探针的3′端标记的荧光淬灭基团为BHQ1；所述内标探针的5′端标记的荧光报告基团是HEX，所述内标探针的3′端标记的荧光淬灭基团为BHQ1。

6.根据权利要求5所述的西尼罗病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，用于制作假病毒的内标核苷酸序列为：

CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAAGTTTCTTGGGACTGCAGGCAACGCAGCCGTCACCACTGTGGTGTTGGAATTGCAGTACACTGGCACGGATGGACCTTGCAAAGTTCCTATC。