[发明专利]一种检测单核苷酸多态性或者点突变的方法

摘要

本发明属于基因检测技术领域，公开了一种检测目标核苷酸序列中单核苷酸多态性SNP位点或者点突变的方法。本发明的方法与目前普遍采用的用4种标记ddNTPs的单碱基延伸方法相比，其改进之处在于，本发明使用的自由核苷酸为标记的dNTP，其为DNA聚合酶的自然底物，所以用含标记的dNTP在进行引物延伸时，比用含标记的ddNTP时更加顺畅和准确。同时，含标记的dNTP价格低廉，利于大规模、高通量地进行检查。此外，本发明还公开了用于检测结核杆菌耐药相关基因中单核苷酸多态性SNP位点或点突变的引物以及含有该引物的试剂盒。

主权项

一种检测目标核苷酸序列中单核苷酸多态性SNP位点或者点突变的方法，所述目标核苷酸序列的3’端与待测位点处核苷酸紧邻的核苷酸序列已知，所述方法包括以下步骤：（a）使所述目标核苷酸序列与一条作为延伸引物的寡聚核苷酸序列杂交，这个作为延伸引物的寡聚核苷酸的序列与目标核苷酸中待测位点的3’端下游序列互补，因此，这个作为延伸引物的寡聚核苷酸序列的3’端位点处核苷酸与目标核苷酸序列中待测位点处核苷酸的3’端紧邻的核苷酸也互补；（b）在反应混合物中，提供与待测位点处核苷酸具有互补碱基的被标记的dNTP；（c）在反应混合物中，相应的聚合酶在适当的条件下将与待测位点处核苷酸互补的被标记的dNTP连接到延伸引物上；（d）对延伸后的引物进行荧光偏振光值（即FP值）测定，分析所得数据，获得所检测的SNP或点突变的相关信息。