[发明专利]一种石斛生物碱类成分的高效液相色谱指纹图谱构建方法及应用

摘要

本发明公开了一种石斛生物碱类成分指纹图谱测定方法，是通过恒温水浴回流萃取技术，利用氨水浸渍石斛粉末，再经氯仿萃取，过滤浓缩干燥得石斛总生物碱粗品，粗品用甲醇溶解得储备液用于高效液相色谱分析，得到石斛生物碱类指纹图谱。本发明优点：所得色谱指纹图谱能较全面反映石斛所含生物碱类成分，体现石斛生物碱类的复杂性，能为不同品种石斛鉴别提供科学依据；所建立的HPLC指纹图谱具有较大的稳定性和重现性，该研究为石斛品种质量控制提供科学参考。

主权项

一种石斛生物碱类成分的高效液相色谱指纹图谱构建方法，其特征在于，所述方法包括：（1）材料收集收集不同石斛品种，并培养组培苗（2）标准石斛样品溶液的制备：取步骤1）的各石斛组培苗在105℃的烘箱中杀青15～20min，60℃烘箱中恒温烘干，粉碎，过60目筛，得样品粗粉，取样品粗粉0.5g，加入5ml氨水，润洗密塞30min，加入氯仿50ml称重，水浴65℃回流3h，冷却后，氯仿补足失重，得提取液；所述提取液旋转蒸发至干，加甲醇5ml溶解，用0.22μm微孔滤膜过滤，所得滤液作为标准石斛样品溶液；（2）色谱条件：色谱柱为C18反相色谱柱；流动相：乙腈和水梯度洗脱；体积流量：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：220nm；进样量：5‑10ul；分析时间：62min；梯度洗脱程序如下时间（min）乙腈（%）水（%）02080508020522080622080所述流动相中加有终浓度0.005%氨水；（3）石斛生物碱类成分指纹图谱的获得，将步骤1）所述的标准石斛样品溶液注入高效液相色谱分析仪中，按步骤2）所述的色谱条件进行测定，获得对应样品的标准指纹图谱。