[发明专利]一种蛋白质快速定量方法

摘要

本发明公开了一种蛋白质快速定量方法，将目的蛋白与铁氧还蛋白rubredoxin的融合蛋白在宿主菌中表达，利用rubredoxin的吸收光谱特性，直接测定宿主菌裂解后的上清中融合蛋白的含量。该方法不仅可用于检测目的蛋白的可溶表达量，还可以用于筛选合适的蛋白表达条件，以及实时监测目的蛋白的表达情况。本发明方法定量准确，操作简便快速，成本低廉，且适用范围广泛，不受仪器和试剂限制。

主权项

一种蛋白质定量方法，包括以下步骤：1）构建待测目的蛋白与铁氧还蛋白rubredoxin的融合蛋白的表达载体，所述表达载体表达的蛋白质除rubredoxin外在460‑520nm范围内均没有吸收峰；2）将构建好的表达载体转入宿主菌，培养宿主菌并表达融合蛋白，其中所述宿主菌除rubredoxin外所表达的外源性蛋白和代谢产物在460‑520nm范围内没有吸收峰；3）表达一定时间后收集宿主菌并裂解，离心，取上清；4）向上清中加入双氧水，将rubredoxin全部转化为氧化态，充分反应后利用紫外‑可见分光光度计测460‑520nm范围内上清的吸收曲线，记录472nm、491nm和510nm处的吸光度值A472、A491和A510，计算ΔA=2A491‑A472‑A5105）将ΔA带入下述公式计算出融合蛋白浓度c，从而得到待测目的蛋白的可溶表达量： c = 7.44 × 10 - 4 cm l ΔA ( mol · L - 1 ) 其中，l是测量吸光度所用比色皿的光路长度。