[发明专利]一种蛋白质快速定量方法

权利要求书

1.一种蛋白质定量方法，包括以下步骤：

1）构建待测目的蛋白与铁氧还蛋白rubredoxin的融合蛋白的表达载体，所述表达载体表达的蛋白质除rubredoxin外在460-520nm范围内均没有吸收峰；

2）将构建好的表达载体转入宿主菌，培养宿主菌并表达融合蛋白，其中所述宿主菌除rubredoxin外所表达的外源性蛋白和代谢产物在460-520nm范围内没有吸收峰；

3）表达一定时间后收集宿主菌并裂解，离心，取上清；

4）向上清中加入双氧水，将rubredoxin全部转化为氧化态，充分反应后利用紫外-可见分光光度计测460-520nm范围内上清的吸收曲线，记录472nm、491nm和510nm处的吸光度值A₄₇₂、A₄₉₁和A₅₁₀，计算

ΔA=2A₄₉₁-A₄₇₂-A₅₁₀

5）将ΔA带入下述公式计算出融合蛋白浓度c，从而得到待测目的蛋白的可溶表达量：

c=7.44×10-4cmlΔA(mol·L-1)]]>

其中，l是测量吸光度所用比色皿的光路长度。

2.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌。

3.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，所述rubredoxin的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No：1所示。

4.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤1）所述融合蛋白中，rubredoxin连接在目的蛋白的C端或N端。

5.如权利要求4所述的蛋白质定量方法，其特征在于，所述融合蛋白中目的蛋白与rubredoxin之间的连接肽序列如序列表中SEQ ID No：9或SEQ ID No：10所示。

6.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤1）所述融合蛋白中除rubredoxin外还融合了其他标签蛋白。

7.如权利要求6所述的蛋白质定量方法，其特征在于，所述其他标签蛋白是His标签蛋白。

8.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤1）构建融合蛋白表达载体的出发载体是pET-21a或pGEX-6p-1。

9.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤3）用超声破碎或加裂解液的方法裂解菌。

10.如权利要求1所述的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤4）双氧水终浓度为0.06%。