[发明专利]裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱

摘要

本发明公开了一种裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法。方法包括：（a）对照品溶液的制备；（b）供试品溶液的制备；（c）色谱条件；（d）以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定；（e）指纹图谱的质量控制。该方法对各供试品的前处理方法简单，特征性成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，具一定的专属性；所得指纹图谱中各特征峰分离效果较好，裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱具有较好的相关性；可用于鉴别裸花紫珠药材的伪劣，增加裸花紫珠制剂生产过程的可控性，有利于保证裸花紫珠制剂的质量稳定和临床疗效。本发明还公开了根据上述指纹图谱检测方法得到的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的标准指纹图谱。

主权项

裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：（1）对照品溶液的制备：称取异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加50%~95%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；（2）供试品溶液的制备：裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液；裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠中间体，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液；裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：取裸花紫珠制剂，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液；（3）HPLC检测：    分别吸取步骤（2）所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；    其中，色谱条件为：色谱柱为C₁₈ 反相色谱柱；DAD检测器；柱温为30~35℃；检测波长为320~340nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1~0.5%磷酸溶液，总流速为0.8~1.2ml/min；分析时间25分钟；采用下述梯度洗脱方式洗脱：0~15分钟时，流动相A:流动相B=16:84~25:75；15~25分钟时，流动相A:流动相B=25:75~39.7:60.3；（4）以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取步骤（2）所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10批裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷；（5）指纹图谱的质量控制将裸花紫珠药材、中间体、制剂指纹图谱与步骤（4）制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。