[发明专利]裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域，特别涉及一种裸花紫珠、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，并由此得到其标准指纹图谱。

背景技术

裸花紫珠为马鞭草科植物裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.）的干燥叶。分布广东、广西、海南等地，生长于海拔1200米的地区。裸花紫珠主要成分为黄酮甙、缩合鞣酸、中性树脂、酚类、多糖、羟基化合物及镁、钙、铁盐等。现代研究表明其有效成分具有止血、抗菌、收敛、解毒、镇痛、以及促进愈合的作用。其抗菌、抗病毒作用，尤其对金葡萄球菌、伤寒杆菌、肺炎双球菌等均有不同的抑制作用，其中对金葡萄球菌，伤寒杆菌抑菌作用最强。裸花紫珠还可抑制毛细血管的通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反应作用，同时可明显缩短出、凝血时间，止血效果显著。目前，市场上裸花紫珠制剂主要有颗粒剂、胶囊剂、片剂、栓剂、合剂等。

裸花紫珠制剂作为中成药，其药效是多种活性成分共同作用的结果。针对裸花紫珠药材或制剂的质量检测方法已公开了不少方法，如CN102955010A记载了一种中药裸花紫珠制剂的质量检测方法，其以木犀草苷为对照品，建立的指纹图谱具有5个共有峰，以木犀草苷为参照峰；中成药2011年第33卷第3期《HPLC法测定裸花紫珠片中毛蕊花糖苷及连翘酯苷的含量》记载了一种测定裸花紫珠片中毛蕊花糖苷及连翘酯苷的含量的HPLC方法。但是现有技术中尚无较好的质量控制方法来准确的反映现有中药材、中间体及成品的质量状况，也无法用于生产过程中、以及产品质量的有效控制，不能较好地保证其临床疗效。因此，建立裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指图谱具有非常重要的意义。

 

发明内容

的花紫珠02] 本发明的目的就是针对裸花紫珠药材、中间体及其制剂的质量控制现状，提供一种基于高效液相色谱法的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法及根据该方法建立得到的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的高效液相色谱指纹图谱，有利于对其原料药材、中间体及其终产品质量的有效控制及保证其临床疗效。

裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括下述主要步骤：

（1）对照品溶液的制备：

称取异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加50%~95%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：

裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液；

裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠中间体，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液；

裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：取裸花紫珠制剂，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液；

（3）HPLC检测：

    分别吸取步骤（2）所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；

    其中，色谱条件为：色谱柱为C₁₈ 反相色谱柱；DAD检测器；柱温为30~35℃；检测波长为320~340nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1~0.5%磷酸溶液，总流速为0.8~1.2ml/min；分析时间25分钟；

采用下述梯度洗脱方式洗脱：0~15分钟时，流动相A:流动相B=16:84~25:75；15~25分钟时，流动相A:流动相B=25:75~39.7:60.3；

（4）以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定

吸取步骤（2）所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10批裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷；

（5）指纹图谱的质量控制