[发明专利]裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱

权利要求书

1.裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：

称取异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加50%~95%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：

裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液；

裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠中间体，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液；

裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：取裸花紫珠制剂，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液；

（3）HPLC检测：

    分别吸取步骤（2）所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；

    其中，色谱条件为：色谱柱为C₁₈ 反相色谱柱；DAD检测器；柱温为30~35℃；检测波长为320~340nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1~0.5%磷酸溶液，总流速为0.8~1.2ml/min；分析时间25分钟；

采用下述梯度洗脱方式洗脱：0~15分钟时，流动相A:流动相B=16:84~25:75；15~25分钟时，流动相A:流动相B=25:75~39.7:60.3；

（4）以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定

吸取步骤（2）所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10批裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷；

（5）指纹图谱的质量控制

将裸花紫珠药材、中间体、制剂指纹图谱与步骤（4）制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。

2.根据权利要求1所述的裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤（2）供试品溶液的制备按照下述方法进行：

裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末0.5~3.0g，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇25~100ml，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液；

裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠浸膏0.25~1.0g，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇25~100ml，称重，回流提取或超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液；

裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：

a、裸花紫珠制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂：取裸花紫珠制剂内容物，研细，称取0.1~3.0g，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇25~100ml，称重，回流提取/超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液；

b、裸花紫珠制剂为合剂、口服液：取裸花紫珠制剂混匀，量取5~10ml，置锥形瓶中，加水或50%~95%乙醇25~100ml，称重，回流提取/超声处理30~90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液。

3.根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中的色谱柱是柱长为250mm的C₁₈ 反相色谱柱。

4.根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中检测波长为327nm。