[发明专利]一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法

摘要

本发明利用大气压低温等离子体发生装置制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法，属于低温等离子体技术应用领域，其特征在于，依次含有以下步骤：培养酵母细胞、选择大气压低温等离子体发生装置的种类并设定工作参数，用大气压低温等离子体处理所述酵母细胞悬液，提取经过等离子体处理的酵母细胞的活性物质。本发明具有高效、方便改变酵母细胞内酶活性的优点。可作为日用品添加剂，起抗紫外、抗氧化、抗老化、保鲜、杀菌、消炎等作用；本发明由于采取微生物发酵生产，不受环境和自然资源的影响，易实现工业化、自动化，工艺方法的生产成本低、简便、稳定、易调控、成功率高；本发明适合多种规模的企业投资。

主权项

一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法，其特征在于，依次按以下步骤进行：1.1酿酒酵母菌株的选择和培养所用的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为Saccharomyces cerevisiae4741MAT a野生型，及其超氧化物歧化酶1(SOD1)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的过表达突变株p‑Sod1，p‑Sod2。具体培养方法如下：1.1.1酵母培养基YAPD的配制YPAD(YEPD+adenine)的成分为：10g酵母提取物(Yeast extract)，20g蛋白胨(Peptone)，120mg腺嘌呤(Adenine)，20g琼脂粉(固体培养基时使用)，加ddH2O定容至1L。灭菌后加50ml已灭菌的40％葡萄糖。1.1.2斜面酵母细胞培养将保藏的酵母菌株接种于YPAD斜面培养基，于30℃恒温、培养36‑48小时，得到一级菌种；1.1.3酵母细胞悬液的制备将一级菌种接种至液体摇瓶培养基培养；液体摇瓶培养基：10g酵母提取物(Yeast extract)，20g蛋白胨(Peptone)，120mg腺嘌呤(Adenine)，50ml已灭菌的40％葡萄糖，蒸馏水定容至1L；在大于100ml三角瓶中加入30～50％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种1～3支斜面菌种，接种后置于全温振荡培养箱，温度30℃、转速100～200rpm，过夜培养，即得到酵母细胞悬液；1.1.4酵母细胞悬液的活化将过夜培养的酵母细胞悬液以1∶100的比列接种于YPAD液体培养基中，在大于100ml的三角瓶中培养1‑2小时，温度30℃、转速200rpm，使其OD值在0.8‑1.0，即得到活化的酵母细胞悬液。1.2低温等离子体处理酵母细胞悬液将低温等离子体的喷嘴没入装有5ml酵母细胞悬液的50ml的离心管的液面以下，通入工作气体，然后打开放电装置，放电处理1‑5分钟让装置产生的等离子体与水接触，进而对溶液中的酵母细胞进行作用。1.3酵母细胞活性物质的提取将经过等离子体处理后的酵母细胞悬液离心收集，然后破除细胞壁，破除细胞膜，离心取上消即为酵母细胞的活性物质，置于‑70℃保存。1.4酵母细胞提取物活性的检测将经过等离子体处理过的酵母细胞的活性提取物，利用GSH和GSSG检测试剂盒、过氧化氢酶检测试剂盒、 CuZn/Mn‑SOD活性检测试剂盒(WST法)检测酵母活性提取物中抗氧化物的活性。