[发明专利]一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法

权利要求书

1.一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法，其特征在于，依次按以下步骤进行：

1.1酿酒酵母菌株的选择和培养

所用的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为Saccharomyces cerevisiae4741MAT a野生型，及其超氧化物歧化酶1(SOD1)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的过表达突变株p-Sod1，p-Sod2。

具体培养方法如下：

1.1.1酵母培养基YAPD的配制

YPAD(YEPD+adenine)的成分为：10g酵母提取物(Yeast extract)，20g蛋白胨(Peptone)，120mg腺嘌呤(Adenine)，20g琼脂粉(固体培养基时使用)，加ddH2O定容至1L。灭菌后加50ml已灭菌的40％葡萄糖。

1.1.2斜面酵母细胞培养

将保藏的酵母菌株接种于YPAD斜面培养基，于30℃恒温、培养36-48小时，得到一级菌种；

1.1.3酵母细胞悬液的制备

将一级菌种接种至液体摇瓶培养基培养；液体摇瓶培养基：10g酵母提取物(Yeast extract)，20g蛋白胨(Peptone)，120mg腺嘌呤(Adenine)，50ml已灭菌的40％葡萄糖，蒸馏水定容至1L；在大于100ml三角瓶中加入30～50％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种1～3支斜面菌种，接种后置于全温振荡培养箱，温度30℃、转速100～200rpm，过夜培养，即得到酵母细胞悬液；

1.1.4酵母细胞悬液的活化

将过夜培养的酵母细胞悬液以1∶100的比列接种于YPAD液体培养基中，在大于100ml的三角瓶中培养1-2小时，温度30℃、转速200rpm，使其OD值在0.8-1.0，即得到活化的酵母细胞悬液。

1.2低温等离子体处理酵母细胞悬液

将低温等离子体的喷嘴没入装有5ml酵母细胞悬液的50ml的离心管的液面以下，通入工作气体，然后打开放电装置，放电处理1-5分钟让装置产生的等离子体与水接触，进而对溶液中的酵母细胞进行作用。

1.3酵母细胞活性物质的提取

将经过等离子体处理后的酵母细胞悬液离心收集，然后破除细胞壁，破除细胞膜，离心取上消即为酵母细胞的活性物质，置于-70℃保存。

1.4酵母细胞提取物活性的检测

将经过等离子体处理过的酵母细胞的活性提取物，利用GSH和GSSG检测试剂盒、过氧化氢酶检测试剂盒、CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒(WST法)检测酵母活性提取物中抗氧化物的活性。

2.根据权利要求1所述的一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法，其特征在于：步骤1.2中，所述的工作气体选自氩气、氦气、空气中的一种或氦气/氩气与氧气两种气体以任意比例的混合气体。

3.根据权利要求1所述的一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法，其特征在于：步骤1.2中，所述的等离子体为非平衡等离子体或低温等离子体；所述放电形式选自辉光放电、电晕放电、介质阻挡放电、射频放电、滑动电弧放电、射流放电中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种基于低温等离子体制备抗氧化、抗紫外的酵母活性提取物的方法，其特征在于：步骤1.3中，所述的酵母细胞的破除细胞壁的方法选自碱破壁法、外加葡聚糖酶法、表面活性剂处理法、酸碱处理法、外加蛋白酶破壁法、盐法破壁、高压均浆法、超声波法气、微波加热法挤压式破壁法、冻融法、有机溶剂法中的一种。