[发明专利]大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法，包括如下步骤：将冷藏的大肠杆菌融化后画线接种于LB平板上，37℃培养过夜后挑取单菌落于加入了MgCl₂溶液的SOB培养基中，37℃振荡培养；取培养液接种于加入了MgCl₂溶液的SOB培养基中，37℃培养；得到的菌液转移至无菌离心管，冰浴后4℃离心；离心液去上清，将沉淀重悬于预冷的TB转化缓冲液中，在冰上放置后4℃离心；离心液去上清，将沉淀重悬于预冷的TB转化缓冲液中，加入DMSO并轻摇混匀；将悬液在冰上放置后分装到预冷的无菌EP管中，得到大肠杆菌感受态细胞。这种大肠杆菌感受态细胞的制备方法不需要低温培养，在普通37℃摇床中培养即可，与传统的感受态细胞制备方法相比，转化效率高且操作简单实用。

主权项

一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将‑80℃冷藏的大肠杆菌融化后画线接种于LB平板上，37℃培养过夜后挑取单菌落于5mL的加入了MgCl₂溶液的SOB培养基中，37℃振荡培养12h～16h；步骤二、取500μL步骤一中得到的培养液接种于50mL的加入了MgCl₂溶液的所述SOB培养基中，37℃培养约3h，使培养液的吸光值OD(A₆₀₀)为0.4～0.6；步骤三、将步骤二中得到的菌液转移至50mL无菌离心管，冰浴10min，接着4℃下4000rpm离心10min；步骤四、将步骤三得到的离心液去上清，将沉淀重悬于15mL预冷的TB转化缓冲液中，在冰上放置10min，接着4℃下4000rpm离心10min；步骤五、将步骤四得到离心液去上清，将沉淀重悬于4mL预冷的所述TB转化缓冲液中，加入DMSO并轻摇混匀，使DMSO的体积浓度为7%；步骤六、将步骤五得到的悬液在冰上放置10min后分装到预冷的无菌EP管中，得到所述大肠杆菌感受态细胞。