[发明专利]一种流感病毒滴度的检测方法

摘要

本发明涉及一种流感病毒感染滴度的检测方法，其特点是利用Vero细胞空斑法检测流感病毒感染性滴度，于35℃培养箱，流感病毒吸附Vero细胞90min后，加入终浓度为1％Agarose覆盖物，3天后加入第二层覆盖物，完全凝固后35℃倒置培养24～48小时判定结果。选择出斑数在10～100个进行数斑，计算出空斑形成单位，并分别与鸡胚法检测病毒滴度进行比较，利用空斑法检测流感病毒感染滴度。具有灵敏度高，重复性好的特点，精密度在1.5％～5.3％之间，适合用来检测流感病毒感染滴度。

主权项

一种流感病毒滴度的检测方法，其特征在于：采用Vero细胞空斑法检测流感病毒感染滴度，其步骤有：(1)将流感病毒按10倍系列稀释，取各稀释度病毒液加入Vero细胞6孔板中，每孔加入0.5ml，每个稀释度加4孔，，35℃吸附90min后倒掉病毒液；(2)加入保持37℃～42℃的第一层覆盖物，每孔3ml，完全凝固后35℃倒置培养72小时；(3)加入保持37℃～42℃的第二层覆盖物，每孔2ml，完全凝固后，35℃倒置培养24～48小时判定结果，选择出斑数在10～100个进行数斑；(4)根据Vero细胞空斑法检测流感病毒感染滴度：(5)将流感病毒稀释至每0.5ml含1～5个病毒(即每孔1～5个空斑)，分别用鸡胚法和空斑法检测流感病毒感染滴度，检测阳性检出率，比较两种方法的灵敏度；(6)分别采用终浓度为1％和0.5％的Agarose覆盖物，进行试验操作，比较不同的终浓度对出斑的影响；(7)35℃培养箱流感病毒分别吸附60min和90min后加入第一层覆盖物，比较不同吸附时间对出斑的影响；(8)流感病毒在33℃和35℃培养时能很好的繁殖，但在较高温度时繁殖减弱，甚至不繁殖；(9)按上述方法，五个不同操作者同时用空斑法检测同一个流感病毒感染滴度，分别重复5次以上，对结果进行分析。