[发明专利]一种检测结核分枝杆菌rpoB突变基因的方法

摘要

本发明属于分子生物学检测领域，涉及结核分枝杆菌利福平耐药性检测方法，提出一种检测结核分枝杆菌rpoB突变基因的方法，采用以下步骤：培养—提取—扩增—纯化—消化—分离—密集—显像—鉴定，与现有的同类检测方法相比，由于采用一次培养，采用新型上、下游引物，由于采用纯化步骤，采用裂解消化，采用在显像前经过密集步骤，由于采用标记地高辛抗体显色系统，以及采用常规设备和易得药剂，所以本发明具有检测快速、检出率高、图谱识别性好、鉴定准确、成本低等显著优点，更确切有效地满足临床诊治的需求。

主权项

一种检测结核分枝杆菌rpoB突变基因的方法，其特征是该方法采用以下步骤：培养‑提取‑扩增‑纯化‑消化‑分离‑密集‑显像‑鉴定，其中：A.培养，采集病人痰液标本于37℃进行一次培养，制备结核分枝杆菌培养物；B.提取，从上述结核分枝杆菌培养物中提取总DNA；C.扩增，采用包括新型上、下游引物在内的反应体系进行PCR反应，扩增出258bp DNA基因片段；D.纯化，对上述PCR反应扩增出的258bpDNA基因片段产物，采用核酸外切酶和DNA片段纯化试剂进行提纯；E.消化，采用核糖核酸裂解酶对纯化后的258bp DNA基因片段产物进行裂解消化，成为长度不同的多个基因片段；F.分离，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离经消化后的多个基因片段；G.密集，将分离后的多个基因片段转移到醋酸纤维滤膜上，并加以提纯、浓缩、密集；H.显像，采用标记地高辛显色系统对密集后的醋酸纤维滤膜进行条带着色显像，得到基因片段图谱；I.鉴定，以正常型做对照，依据图谱中条带长度、数量、迁移位置及显像强度鉴别确定结核分枝杆菌rpoB突变基因。