[发明专利]一种高效评估药物对hERG通道安全性的评价方法

摘要

本发明公开一种高效评估药物对hERG通道安全性的评价方法。它是先常规培养表达hERG通道的细胞株然后弃去其培养基将细胞株加入到固定缓冲液中，在细胞株的常规培养条件下孵育1-4h，弃去固定缓冲液，再加入含待检药物的固定缓冲液，孵育5-40min，再弃去含待检药物的固定缓冲液，用洗涤缓冲液洗涤细胞株，洗掉残留Rb+，再加入离子通道开放缓冲液孵育5-20min，移去细胞上清液，将细胞株裂解得细胞裂解液，分别测定细胞上清液和细胞裂解液中的Rb+浓度；再设置含待检药物的固定缓冲液中的待检药物为不同浓度重复测定，根据不同浓度的待检药物的测定所得的数据得到IC50值，如果IC50值≤1000μmol/L就认为该待检药物对hERG通道具有一定的阻滞作用，IC50值越小抑制作用越大心肌毒性的风险越大。

主权项

一种高效评估药物对hERG通道安全性的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：常规培养表达hERG通道的细胞株，然后弃去其培养基，将细胞株加入到固定缓冲液中，在细胞株的常规培养条件下孵育1‑4h，然后弃去固定缓冲液，再加入含待检药物的固定缓冲液，孵育5‑40min，再弃去含待检药物的固定缓冲液，用洗涤缓冲液洗涤细胞株，洗掉残留Rb+，然后再加入离子通道开放缓冲液，孵育5‑20min，移去细胞上清液，将细胞株裂解得细胞裂解液，分别测定细胞上清液和细胞裂解液中的Rb+浓度；再将上述含待检药物的固定缓冲液中的待检药物设定为其他不同浓度，按照上述方法重复测定，根据不同浓度的待检药物的测定所得的数据，得到该待检药物的IC50值，如果IC50值≤1000μmol/L就认为该待检药物对hERG通道具有一定的阻滞作用，IC50值越小，说明该药物对hERG通道的抑制作用越大，心肌毒性的风险越大；所述的固定缓冲液：RbCl 2‑10mM，NaCl 120‑180mM，CaCl2 1‑3mM，NaH2PO4 0.4‑1.2mM，MgCl2 0.8‑1.2mM，glucose 3‑7mM、HEPES 20‑30mM，余量为水；所述的洗涤缓冲液：KCl 2‑10mM，NaCl 120‑180mM，CaCl2 1‑3mM，NaH2PO4 b0.4‑1.2mM，MgCl2 0.8‑1.2mM，glucose 3‑7mM、HEPES 20‑30mM，余量为水；所述的离子通道开放缓冲液：KCl 20‑80mM，NaCl 70‑130mM，CaCl2 1‑3mM，NaH2PO40.4‑1.2mM，MgCl2 0.8‑1.2mM，glucose 3‑7mM、HEPES 20‑30mM，余量为水。