[发明专利]一种高效评估药物对hERG通道安全性的评价方法

权利要求书

1.一种高效评估药物对hERG通道安全性的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

常规培养表达hERG通道的细胞株，然后弃去其培养基，将细胞株加入到固定缓冲液中，在细胞株的常规培养条件下孵育1-4h，然后弃去固定缓冲液，再加入含待检药物的固定缓冲液，孵育5-40min，再弃去含待检药物的固定缓冲液，用洗涤缓冲液洗涤细胞株，洗掉残留Rb⁺，然后再加入离子通道开放缓冲液，孵育5-20min，移去细胞上清液，将细胞株裂解得细胞裂解液，分别测定细胞上清液和细胞裂解液中的Rb⁺浓度；再将上述含待检药物的固定缓冲液中的待检药物设定为其他不同浓度，按照上述方法重复测定，根据不同浓度的待检药物的测定所得的数据，得到该待检药物的IC₅₀值，如果IC₅₀值≤1000μmol/L就认为该待检药物对hERG通道具有一定的阻滞作用，IC₅₀值越小，说明该药物对hERG通道的抑制作用越大，心肌毒性的风险越大；

所述的固定缓冲液：RbCl 2-10mM，NaCl 120-180mM，CaCl₂ 1-3mM，NaH₂PO₄ 0.4-1.2mM，MgCl₂ 0.8-1.2mM，glucose 3-7mM、HEPES 20-30mM，余量为水；

所述的洗涤缓冲液：KCl 2-10mM，NaCl 120-180mM，CaCl₂ 1-3mM，NaH₂PO₄ b0.4-1.2mM，MgCl₂ 0.8-1.2mM，glucose 3-7mM、HEPES 20-30mM，余量为水；

所述的离子通道开放缓冲液：KCl 20-80mM，NaCl 70-130mM，CaCl₂ 1-3mM，NaH₂PO₄0.4-1.2mM，MgCl₂ 0.8-1.2mM，glucose 3-7mM、HEPES 20-30mM，余量为水。

2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述的表达hERG通道的细胞株为表达

hERG通道的CHO细胞株或HEK 293细胞株。

3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述的常规培养表达hERG通道的细胞

株是常规培养表达hERG通道的细胞株直至聚合度为80~90%。

4.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述的将细胞株加入到固定缓冲液中，在细胞株的常规培养条件下，孵育时间为2.5h，所述的再加入含待检药物的固定缓冲液，孵育时间为30min，所述的再加入离子通道开放缓冲液，孵育时间为10min。

5.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述的固定缓冲液为：RbCl 5.4mM，NaCl150mM，CaCl₂ 2mM，NaH₂PO₄ 0.8mM，MgCl₂ 1mM，glucose 5mM，HEPES 25mM，余量为水。

6.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述的洗涤缓冲液为：KCl 5.4mM，NaCl150mM，CaCl₂ 2mM，NaH₂PO₄ 0.8mM，MgCl₂ 1mM，glucose 5mM，HEPES 25mM，余量为水。

7.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述的离子通道开放缓冲液为：KCl 50mM，NaCl 100mM，CaCl₂ 2mM，NaH₂PO₄ 0.8mM，MgCl₂ 1mM，glucose 5mM，HEPES 25mM，余量为水。

8.根据权利要求1、5、6或7所述的评价方法，其特征在于，所述的固定缓冲液、洗涤缓冲液和离子通道开放缓冲液的pH值为7.4。