[发明专利]一种TaqMan探针荧光RT-PCR检测创伤弧菌的非诊断性方法

摘要

本发明公开了一种TaqMan探针荧光RT-PCR检测创伤弧菌的非诊断性方法，以创伤弧菌溶血素vvhA基因的DNA序列作为靶序列，比对后选取保守区域，确定vvhA基因的保守序列，设计创伤弧菌实时PCR引物和探针，创伤弧菌实时PCR检测方法利用特异性荧光探针，实行完全闭管式操作，大大减少了扩增产物污染的机会、减少了实验步骤、实验时间和对试剂的消耗，不同于常规PCR，无需电泳鉴定，不易污染环境出现假阳性结果，该方法能快速地检测到致病菌，具有很高的灵敏度、特异度和检测下限，可以用于国境口岸环境水体、水产品以及腹泻病人粪便中创伤弧菌的检测，有很高的应用价值。

主权项

1.一种TaqMan探针荧光RT-PCR检测创伤弧菌的非诊断性方法，其特征在于，该非诊断性方法包括：以创伤弧菌溶血素vvhA基因的DNA序列作为靶序列，比对后选取保守区域，确定vvhA基因的保守序列：tgggtatttg ataagacgaa gttcaaccca atctcttatt ccaacttcaa accgaactatgacgttttgt acgaagcgcc tgtgtctgaa actggcgtaa cggatttcga gatgggcgtgaaactcaact atcgtgcacg ctttggtacg gtaatccctt cagcactctt ctcagtttatggttctgcgg gctcgtcaac caacagcagt accgtgaaac aacgtattcg catcgactggaatcatccac tgtttgaagc ggaagcacac gttacactac aatcactgag caacaacgatctctgcctag atgtttatgg tgagaacggt gacaaaacgg ttgcgggtgg ttcggttaacggctggagct gtcacggcag ttggaaccaa gtttggggcc tagataaaga agaacgttaccgtagccgag tggcatccga tcgttgtttg accgtaaacg cagacaaaac gctcacagtcgaacagtgtg gtgcgaactt agcacagaaa tggtattggg aa；设计创伤弧菌实时PCR引物和探针：