[发明专利]利用生物发酵和固定化酶法制备蔗糖-6-乙酯的方法

摘要

一种利用生物发酵和固定化酶法制备蔗糖-6-乙酯的方法，工艺步骤为：对巨大芽胞杆菌的发酵培养基加以改进；对枯草杆菌进行诱导培养，提取特异性果糖基转移酶并制成固定化果糖基转移酶；将炭黑曲霉制成固定化增殖细胞；固定化增殖细胞和固定化果糖基转移酶一起以葡萄糖-6-乙酯和蔗糖为底物，将葡萄糖-6-乙酯转化为蔗糖-6-乙酯；最后用色谱分离树脂柱纯化蔗糖-6-乙酯。用本发明方法生产葡萄糖-6-乙酯，产量从15g/L发酵液提高到55g/L，提供了可以重复使用的固定化酶，蔗糖-6-乙酯的产率能够提升到80％左右，并以色谱分离树脂柱代替制备型高效液相色谱法来纯化蔗糖-6-乙酯，大幅降低了成本。

主权项

一种利用生物发酵和固定化酶法制备蔗糖‑6‑乙酯的方法，其特征是工艺步骤为：(1)对巨大芽胞杆菌Bacillus megaterium NCIM 2087发酵葡萄糖的发酵培养基加以改进，增加培养基中葡萄糖的含量，并添加乙酸钠和氯化钴等成分；(2)对枯草杆菌Bacillus subtilis CGMCC 1.1467进行诱导培养，提取特异性果糖基转移酶EC 2.4.1.162，并制成固定化果糖基转移酶；(3)将炭黑曲霉Aspergillus carbonarius CGMCC 3.879制成固定化增殖细胞；(4)将炭黑曲霉制成的固定化增殖细胞和枯草杆菌产出的固定化果糖基转移酶一起，以葡萄糖‑6‑乙酯和蔗糖为底物，将葡萄糖‑6‑乙酯转化为蔗糖‑6‑乙酯；(5)最后用DTF‑01色谱分离、用树脂柱纯化蔗糖‑6‑乙酯，可以获得85％纯度产品。