[发明专利]快速纯化及制备细菌PCR反应模板的方法无效
| 申请号： | 201210095106.5 | 申请日： | 2012-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN102533739A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 解宇 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州裕阳专利事务所(普通合伙) 33221 | 代理人： | 应圣义 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物学领域，公开了一种快速纯化及制备细菌PCR反应模板的方法，将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面，制成免疫BMPs。使用免疫BMPs，对含有不同浓度大肠杆菌O157的粪便标本，进行目标病原菌的捕获、分离和洗净，再使用洗净的病原菌制备PCR反应模板。本发明利用免疫BMPs捕获自然标本（粪便）中的目标病原菌，通过分离和洗净，去除标本中存在的PCR反应抑制物等影响因素，可省略增菌培养及鉴别培养，快速纯化目标病原菌的PCR反应模板。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 纯化 制备 细菌 pcr 反应 模板 方法 | ||
【主权项】：
快速纯化及制备细菌PCR反应模板的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a：牛粪便标本中添加PBS溶液5 mL，混匀，1000 r/min离心30 s，去除大颗粒的杂质；步骤b：向含菌的牛粪稀释液中添加免疫BMPs 0.3 mg，混合均匀，反应30 min后进行磁性诱导，从牛粪中分离出磁性凝集物；步骤c：分离出来的磁性凝集物使用PBS溶液分散清洗3次，清洗后，添加灭菌双蒸水100 μL，分散，重新振荡悬浮后至95℃加热5 min；再经12000 r/min离心5 min；步骤d：回收上清液，制得PCR反应模板。
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