[发明专利]一种针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备

摘要

本发明涉及一种针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备。实验构建了针对hNINL基因的ShRNA的慢病毒载体，将合成的针对ShRNA的DNA片段通过慢病毒载体介导，还与pHelper 1.0、pHelper2.0两种载体共转染293T细胞培养，获得重组慢病毒载体后，转染目的细胞，实现针对hNINL基因的RNA干扰。采用的自身失活的第三代慢病毒载体(SIN)，具有安全可靠、可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长时程表达、免疫反应小等优点，是一种理想载体。本发明的慢病毒载体，对人乳腺癌细胞MCF-7干扰效果达60-85％，因此本发明重组慢病毒载体为有关hNINL基因的进一步研究奠定良好实验基础，并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。

主权项

一种针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体，该载体是自身失活的第三代慢病毒载体SIN，其特征在于，所述的载体SIN含有pGCSIL‑GFP/U6‑Sh hNINL重组载体，所述的pGCSIL‑GFP/U6‑Sh hNINL重组载体是在pGCSIL‑GFP载体的多克隆位点中连接了双链DNA片段；所述的双链DNA片段的序列为以下序列中的一种：(1)hNINL‑homo‑284：hNINL‑homo‑284‑S：5’‑GATCCTGTGGCTGTGTTGTCTTCATTCAAGAGATGAAGACAACACAGCCACATTTTTTG‑3’hNINL‑homo‑284‑AS：5’‑AATTCAAAAAATGTGGCTGTGTTGTCTTCATCTCTTGAATGAAGACAACACAGCCACAG‑3’(2)hNINL‑homo‑810：hNINL‑homo‑810‑S：5’‑GATCCGATCAAGACGGAGACGGCATTCAAGAGATGCCGTCTCCGTCTTGATCTTTTTTG‑3’hNINL‑homo‑810‑AS：5’‑AATTCAAAAAAGATCAAGACGGAGACGGCATCTCTTGAATGCCGTCTCCGTCTTGATCG‑3’(3)hNINL‑homo‑3283：hNINL‑homo‑3283‑S：5’‑GATCCGGGCTCTGGAGAAACATGTTTCAAGAGAACATGTTTCTCCAGAGCCCTTTTTTG‑3’hNINL‑homo‑3283‑AS：5’‑AATTCAAAAAAGGGCTCTGGAGAAACATGTTCTCTTGAAACATGTTTCTCCAGAGCCCG‑3’。