[发明专利]一种针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备无效
| 申请号： | 201210093524.0 | 申请日： | 2012-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN102643859A | 公开（公告）日： | 2012-08-22 |
| 发明（设计）人： | 殷浩金 | 申请（专利权）人： | 常熟市常福有机复合肥有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/113;C12N15/66 |
| 代理公司： | 苏州广正知识产权代理有限公司 32234 | 代理人： | 汪发春 |
| 地址： | 215522 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 针对 hninl 基因 rna 干扰 重组 病毒 载体 及其 制备 | ||
1.一种针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体，该载体是自身失活的第三代慢病毒载体SIN，其特征在于，所述的载体SIN含有pGCSIL-GFP/U6-Sh hNINL重组载体，所述的pGCSIL-GFP/U6-Sh hNINL重组载体是在pGCSIL-GFP载体的多克隆位点中连接了双链DNA片段；所述的双链DNA片段的序列为以下序列中的一种：
(1)hNINL-homo-284：
hNINL-homo-284-S：
5’-GATCCTGTGGCTGTGTTGTCTTCATTCAAGAGATGAAGACAACACAGCCACATTTTTTG-3’
hNINL-homo-284-AS：
5’-AATTCAAAAAATGTGGCTGTGTTGTCTTCATCTCTTGAATGAAGACAACACAGCCACAG-3’
(2)hNINL-homo-810：
hNINL-homo-810-S：
5’-GATCCGATCAAGACGGAGACGGCATTCAAGAGATGCCGTCTCCGTCTTGATCTTTTTTG-3’
hNINL-homo-810-AS：
5’-AATTCAAAAAAGATCAAGACGGAGACGGCATCTCTTGAATGCCGTCTCCGTCTTGATCG-3’
(3)hNINL-homo-3283：
hNINL-homo-3283-S：
5’-GATCCGGGCTCTGGAGAAACATGTTTCAAGAGAACATGTTTCTCCAGAGCCCTTTTTTG-3’
hNINL-homo-3283-AS：
5’-AATTCAAAAAAGGGCTCTGGAGAAACATGTTCTCTTGAAACATGTTTCTCCAGAGCCCG-3’。
2.权利要求1所述的针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体的制备方法，其特征在于，根据hNINL mRNA序列，设计合成了双链DNA片段，所述的双链DNA片段为以下序列中的一种：
(1)hNINL-homo-284：
hNINL-homo-284-S：
5’-GATCCTGTGGCTGTGTTGTCTTCATTCAAGAGATGAAGACAACACAGCCACATTTTTTG-3’
hNINL-homo-284-AS：
5’-AATTCAAAAAATGTGGCTGTGTTGTCTTCATCTCTTGAATGAAGACAACACAGCCACAG-3’
(2)hNINL-homo-810：
hNINL-homo-810-S：
5’-GATCCGATCAAGACGGAGACGGCATTCAAGAGATGCCGTCTCCGTCTTGATCTTTTTTG-3’
hNINL-homo-810-AS：
5’-AATTCAAAAAAGATCAAGACGGAGACGGCATCTCTTGAATGCCGTCTCCGTCTTGATCG-3’
(3)hNINL-homo-3283：
hNINL-homo-3283-S：
5’-GATCCGGGCTCTGGAGAAACATGTTTCAAGAGAACATGTTTCTCCAGAGCCCTTTTTTG-3’
hNINL-homo-3283-AS：
5’-AATTCAAAAAAGGGCTCTGGAGAAACATGTTCTCTTGAAACATGTTTCTCCAGAGCCCG-3’
然后将所述的DNA片段连接到pGCSIL-GFP载体的多克隆位点中构建成pGCSIL-GFP/U6-Sh hNINL重组载体；再将pGCSIL-GFP/U6-Sh hNINL重组载体、pHelper1.0、pHelper 2.0三种载体共转染293T细胞培养，获得所述的重组慢病毒载体。
3.根据权利要求2所述的针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体的制备方法，其特征在于，在所述的双链DNA片段末端引入BamH I和EcoR I酶切位点。
4.根据权利要求2所述的针对hNINL基因RNA干扰的重组慢病毒载体的制备方法，其特征在于，用BamHI和EcoRI酶将pGCSIL-GFP载体酶切，回收大片段后将其与所述双链DNA片段连接后转化感受态菌，挑取重组阳性克隆。
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