[发明专利]百日咳杆菌69KD外膜蛋白的纯化方法无效
| 申请号： | 201210027545.2 | 申请日： | 2012-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN102584958A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 肖詹蓉;王玲 | 申请（专利权）人： | 北京天坛生物制品股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/235 | 分类号： | C07K14/235;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 丁香兰 |
| 地址： | 100024 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于蛋白分离纯化领域，涉及百日咳杆菌的69KD外膜蛋白的工业化大规模分离纯化方法。所述方法包括：a.将百日咳杆菌CS菌体用含1mol/L至2mol/L氯化钠的pH8.8的缓冲液在40至60℃浸提30分钟至3小时，离心，收集上清，得到含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清；b.在含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到15％重量/体积至25％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，收集上清；c.在步骤b收集的上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到30％重量/体积至38％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，弃上清，收集沉淀；d.以Tris-HCl缓冲液溶解步骤c中收集的沉淀并透析除去硫酸铵；e.过DEAE sepharose离子交换柱，用线性梯度氯化钠浓度从0mol/L至1mol/L的缓冲液洗脱，收集目的蛋白。本发明的方法可以快速、简便、低成本纯化天然构象69KD外膜蛋白，从而可用于大规模工业制备天然构象69KD外膜蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 百日咳杆菌 69 kd 膜蛋白 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种提纯百日咳菌的69KD外膜蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：b.在含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到15％重量/体积至25％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，收集上清；c.在步骤b收集的上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到30％重量/体积至38％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，弃上清，收集沉淀；d.以Tris‑HCl缓冲液溶解步骤c中收集的沉淀并透析除去硫酸铵；e.过DEAE sepharose离子交换柱，用线性梯度氯化钠浓度从0mol/L至1mol/L的缓冲液洗脱，收集目的蛋白。
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