[发明专利]百日咳杆菌69KD外膜蛋白的纯化方法无效
| 申请号： | 201210027545.2 | 申请日： | 2012-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN102584958A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 肖詹蓉;王玲 | 申请（专利权）人： | 北京天坛生物制品股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/235 | 分类号： | C07K14/235;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 丁香兰 |
| 地址： | 100024 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 百日咳杆菌 69 kd 膜蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种提纯百日咳菌的69KD外膜蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
b.在含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到15％重量/体积至25％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，收集上清；
c.在步骤b收集的上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到30％重量/体积至38％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，弃上清，收集沉淀；
d.以Tris-HCl缓冲液溶解步骤c中收集的沉淀并透析除去硫酸铵；
e.过DEAE sepharose离子交换柱，用线性梯度氯化钠浓度从0mol/L至1mol/L的缓冲液洗脱，收集目的蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤b中的硫酸铵浓度为20％(重量/体积)。
3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤c中的硫酸铵浓度为33％(重量/体积)。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，步骤e中的DEAE sepharose离子交换柱为DEAE sepharoseCL-6B离子交换柱。
5.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，步骤e中的洗脱缓冲液的pH为8.5至9.0，流速为0.4ml/分钟至0.6ml/分钟，所述69KD外膜蛋白的氯化钠洗脱浓度为0.05mol/L至0.12mol/L。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述69KD外膜蛋白的氯化钠洗脱浓度为0.07mol/L。
7.如权利要求1至3中任一项所述的方法，所述方法还包括步骤a：
a.将百日咳杆菌CS菌体用含1mol/L至2mol/L氯化钠的pH8.8的缓冲液在40至60℃浸提30分钟至3小时，离心，收集上清，得到含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清。
8.如权利要求7所述的方法，其中，步骤a中的氯化钠浓度为1mol/L。
9.如权利要求7所述的方法，其中，步骤a中的浸提温度为40至60℃。
10.如权利要求7所述的方法，其中，步骤a中的浸提时间为1小时至3小时。
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